193039. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-21978C ciklusos peptid N-szubsztituált származékainak előállítására
193039 ridok és a 2,4,5-triklór-fenil-észterek/ előállítására használt alkán- és alkénsav kiindulási anyagok ismert vegyületek, vagy ismert vegyületekből ismert eljárásokkal előállíthatok. A 2,4,5-triklór-fenil-észtereket célszerűen úgy állítjuk elő, hogy az alkán- vagy alkénsav savkloridját 2,4,5-triklór-fenollal kezeljük piridin jelenlétében, vagy a szabad atkán- vagy alkénsavat 2,4,5-triklór-fenollal kezeljük N;N’-diciklohexil-karbodiimid jelenlétében. A 2,4,5-triklór-fenil-észter származékok szilikagélen oszlopkromatográfiával tisztíthatok. A találmány szerinti A-21978C ciklusos peptidek baktériumellenes anyagokként használva orálisan vagy parenterálisan alkalmazhatók. A szakember előtt érthető, hogy az A-21978C vegyületet szokásosan gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval vagy hígítóval együtt alkalmazzuk. Az A-21978C vegyület dózisát számos megfontolás befolyásolja, mint például a használandó vegyület és a kezelendő fertőzés természete és súlyossága. Az alkalmazandó dózis-tartományokat vagy dózis-egységeket a szakember előtt ismert módon a MIC /minimális gátló koncentráció/ és az ED50 /hatásos dózis 50%-a/ értékek, a toxicitási adatok, valamint egyéb, például íarmakokinetikai tényezők, a beteg /gazdaszervezet/ és a fertőző mikroorganizmus jellemzői figyelembevételével határozzuk meg. A találmány teljesebb bemutatására szolgálnak az alábbi példák, anélkül, hogy a találmány hatókörét korlátoznák. 1. preparálás A-21978C mag előállítása A. Actinoplanes utahensis fermentációja Ferde agaron Actinoplanes utahensis törzs-tenyészetet készítünk és tartunk fenn. Ferde agar táptalajként a következők egyikét hasz9 náljuk: A. táptalaj Komponensek Mennyiség Előfőzött zabliszt 60,0 g Élesztő 2,5 g k2hpo4 1,0 g Czapek-féle ásványi törzsoldaf 5,0 ml Agar 25,0 g Ionmentesített víz 1 literig Autoklávozás előtt a pH körülbelül 5,9; a pH-t nátrium-hidroxíddal 7,2-re állítjuk be; autoklávozás után a pH körülbelül 6,7. *A Czapek-féle ásványi törzsoldat összetétele a következő: Alkotórészek Mennyiség FeS04-7H20 /2 ml tömény HCL-oldatban oldva/ 2 g KC1 100 g MgS04-7H20 100 g Ionmentesített víz 1 literig B. táptalaj Alkotórészek Mennyiség Burgonya-dextrin 5,0 g Élesztökivonat 0,5 g Enzimatikus kazein-hidrolizátum* 3,0 g 10 Marhahúskivonat 0,5 g Glükóz 12,5 g Kukoricakeményítő 5,0 g Híis-pepton 5,0 g Melasz 2,5 g MgS04-7H20 0,25 g CaC03 1,0 g Czapek-féle ásványi törzsoldat 2,0 ml Agar 20,0 g Ionmentesített víz 1 literig *N-Z-Amine A, Humko Sheffield Chemical, Lyndhurst, NJ. A ferde agart beoltjuk Actinoplanes utahensis NRRL 12052-vel és 30°C-on 8-10 na-pig inkubáljuk. A ferde agaron nőtt tenyészet felével beoltjuk az alábbi összetételű 50 ml vegetatív táptalajt: Alkotórészek Mennyiség Előfőzött zabliszt 20,0 g Szacharóz 20,0 g Élesztő 2,5 g Szárított szeszgyári gabonatörköly* 5,0 g k2hpo4 1,0 g Czapek-féle ásványi törzsoldat 5,0 ml Ionmentesített víz 1 literig A pH-t nátrium-hidroxiddal 7,4-re állítjuk be; autoklávozás után a pH körülbelül 6,8. ^National Distillers Products Co., 99 Park Ave., New York, N.Y. A beoltott vegetatív táptalajt 250 ml-es bőnyakú Erlenmeyer-lombikban 30°C-on mintegy 72 óráig inkubáljuk, 5 cm átmérőjű ív körül percenként 250 forgást végző rázógépen. . A fenti inkubált vegetatív táptalajjal közvetlenül beoltunk egy második fokozatú vegetatív táptalajt. Előnyösen félretehetjük későbbi felhasználáshoz, a tenyészetet folyékony nitrogén gőzfázisában tartva. Ilyen tároláshoz a tenyészetet több kis fiolában állítjuk elő a következőképpen: mindegyik fiolába bemérünk 2 ml beoltott vegetatív táptalajt és 2 ml glicerin/laktóz oldatot (lásd W.A. Dailey és C.E. Higgins, „Preservation and Storage of Microorganisms in the Gas Phase of Liquid Nitrogen", Cryobiol. 10, 364-367 (1973)). Az előállított szuszpenziókaî a folyékony nitrogén gőzfázisában tároljuk. Az így elkészített, tárolt szuszpenziót (1 ml) használjuk 50 ml első fokozatú vegetatív táptalaj beoltására (melynek összetételét fentebb megadtuk). A beoltott első fokozatú vegetatív táptalajt a fentiek szerint infubáljuk. Nagyobb térfogatú inokulum előállítása céljából az inkubált első fokozatú vegetatív táptalaj 10 ml-ével beoltunk 400 ml második fokozatú vegetatív táptalajt, melynek összetétele azonos az első fokozatúéval. A második fokozatú táptalajt 2 literes bőnyakú Erlenmeyer-lombikban 30°C-on 48 óráig inkubál-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
