193039. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-21978C ciklusos peptid N-szubsztituált származékainak előállítására
193039 gyületet acilezni, melyben az ornitin deltái -aminocsoportját /R° pozíció/ amino-védőcsoport blokkolja. Ilyen kiindulási anyagokat előnyösen úgy kapunk, hogy az A-2I978C faktort ebben a pozícióban védjük a dezacilezés előtt. A kinurenin aromás aminocsoportja az A-21978C mag három szabad aminocsoportja közül a legkevésbé reakcióképes. A kinurenin acilezésekor megfelelően védjük a triptofán és ornitin aminocsoportjait, de az R vagy R1 helyzetben történő acilezéskor a kinurenin aminocsoportját általárban nem blokkoljuk. Az I., II. és III. reakcióvázlat az olyan 1 általános képletű vegyületek előállításának általános módszereit mutatja be, ahol az R, R1 vagy R2 szubsztituensek egyike alkanoil-, alkenoilcsoport vagy amino-védőcsoport. E reakcióvázlatokban a következő szimbólumokat alkalmazzuk: [*] = az A-21978C maradványa Nt = triptofán alfa-aminocsoportja N0 = ornitin delta-aminocsoportja Nk = kinurenin aromás aminocsoportja R, R1, R2 =szubsztituensek, a meghatározás szerint RM = természetes faktor acilcsoportja B, B1 = amino-védőcsoportok acil = acilező művelet dezacil = dezacilező művelet blokk == acilezés amino-védőcsoport jelenlétében deblokk = amino-védőcsoport eltávolítása Az I. reakcióváziatban az A-21978C NrrP-monoacilszármazékait'a 3 általános képlet és az A-21978C Nrrp, Nor„-diacilszármazékait a 4 általános képlet szemlélteti. Azokat az N^p, Norn-diacilszármazékokat, melyekben az NnP-acilcsoport természetes A-21978C faktor megfelelő csoportjából származik, a 8 általános képlet mutatja be. A II. reakcióvázlatban az A-21978C Nrrp, Nxin-diacilszármazékait a 10 általános képlet szemlélteti. Azokat az NT/p,Niti„-diacilszármazékokat, ahol az NTiP-aciícsoport természetes A-21978C faktor megfelelő csoportjából származik, a 12 általános képlet mutatja be. Az 5, 6 és 7 általános képletű vegyületeket ugyancsak leírja az I, reakcióvázlat. A III. reakcióvázlatban az A-21978C Norn-monoacilszármazékait a 18 általános képlet, az A-21978C N^-monoacilszármazékait a 15 általános képlet,’és az A-21978C Nor„,N*m-diacilszármazékait a 20 általános képlet szemlélteti. A 6 általános képletű vegyületeket szintén leírja az I. és a II. reakcióvázlat. Azokat az 1 általános képletű vegyületeket, melyekben egy vagy több aminocsoportot alkilidenilcsoport /a Schiff-bázisok/ vagy alkilcsoport /a redukált Schiff-bázisok/ szubsztituálják, Schiff-bázisok előállítására, illetve az ilyen bázisok redukálására használatos ismert eljárásokkal állítjuk elő. így a Schiff-bázisokat úgy kapjuk meg, hogy az A-21978C 7 Triptofán, ornitin vagy kinurenin aminosavának primer aminocsoportját alkalmas oldószerben megfelelő aldehiddel vagy ketonnal reagáltatjuk /kondenzáció/. Olyan megfelelő 1 általános képletű vegyület előállítása céljából, melyben R, R1 vagy R2 alkilcsoportot jelent, a Schiff-bázis iminkötését ismert szelektív redukciós eljárásokkal redukáljuk. E reakcióhoz előnyben részesítjük a nátrium-ciano-bór-hidrid redukálószert. Az alkalmazott in vitro próbák körülményei között a Schiff-bázisok nem mutatnak antibakteriális hatékonyságot, feltehetően a reakcióközegben bekövetkező bomlékonyságuk következtében. Felhasználhatók azonban köztitermékekként a redukált Schiff-bázisokhoz. Ha köztitermékként Schiff-bázist alkalmazunk, nem kell a köztjterméket izolálni a redukált Schiff-bázissá való alakításhoz szűk-« séges redukció végrehajtása előtt. Azokat az 1 általános képletű vegyületeket, ahol R, R1 vagy R2 egyike alkanoil- vagy alkenoilcsoportot jelent, előnyösen az aktív észter-eljárással állítjuk elő. A 3 általános képletű vegyület, ahol R’ = H és R° = t-BOC, azaz az A-21978C Nßvrt-BOC mag vagy „tBOC mag" különösen előnyös kiindulási anyag az 1 általános képletű vegyületek előállításához. A kívánt sav-oldallánc 2,4,5-triklór-fenil-észtere a leginkább előnyben részesített acilező reagens. E módszer szerint feles mennyiségű aktív észtert reagáltatunk a t-BOC maggal szobahőmérsékleten, közömbös szerves oldószerben, mint DMF-ban, THF-ban, dietil-éterben vagy diklór-metánban. A reakcióidő nem kritikus, bár előnyös a mintegy 6-20 órás reagáltatás. A reakciót végrehajtva az oldószert eltávolítjuk,és a maradékot tisztítjuk. Különösen hasznos tisztító eljárás a fordított fázisú HPLC, álló fázisként szilikagél/C,« fordított fázisú gyantát és oldószerrendszerként H20/CH3OH/CH3CN/piridin/HOAc elegyet használva. A t-BOG csoport trifluor-ecetsav/anizol/trietil-szilán, vagy előnyösen trifluor-ecetsav/l,2-etánditiol keverékek segítségével szobahőmérsékleten mintegy 3-5 perc alatt távolítható el. Az oldószer lepárlása után a maradék fordított fázisú HPLC-vel tisztítható. Alternatív acilező eljárás a módosított Schotten-Baumann reakció, melynél a nem-blokkolt magot a kívánt alkánsav vagy alkénsav savkloridjával kezeljük piri din /víz elegyben. E módszernél, közömbös szerves oldószerben /mint aceton/ oldott feles menynyiségű savkloridot adunk lassan a mag 90% piridin/10% víz /v per v/ eleggyel készült oldatához. A nem reagált savkloridot a reakció termékétől vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel /például dieti 1 -éter/ való kivonással választjuk el. A végső tisztítás fordított fázisú HPLC-vel történik, a fentebb leírtak szerint. Az acilezési reakcióban kiindulási anyagokként használt alkán- és alkénsavak és reakcióképes származékaik /különösen a savklo-8 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
