193039. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-21978C ciklusos peptid N-szubsztituált származékainak előállítására
193039 NTiy-/n-DekanoU/-A-2l978C mag /4. vegyület/ A következő művelet a vegyilletek „aktív észter" eljárással történő, üzemi szintű előállítását illusztrálja. A 2.4,5-Triklór-fenil-n-dekanoát előállítása Dekanoil-klorid (Pfaltz és Bauer, 5,6 ml) és 2,4,5-triklór-fenol (5,6 g) dietil-éterrel (1 liter) és piridinnel (120 ml) készült oldatát 4 óráig keverjük. A reakcióelegyet szűrjük és vákuumban szárítjuk. A 2,4,5-triklór-fenil-n-dekanoátot szilikagéloszlopon (Woelm) tisztítjuk toluol eluenst használva. A frakciókat TLC-vel ellenőrizzük, a detektáláshoz rövidhullámú UV fényt használva. A megfelelő frakciókat egyesítve és vákuumban megszárítva 10,4 g 2,4,5-triklór-íenil-n-dekanoátot kapunk. B. N0,n-t-BOC-A-21978C mag acilezése 2,4,5- -triklór-fenil-n-dekanoáttal Norn-t-BOC-A-21978C mag (15,0 g) és 2,4,5-triklór-fenil-n-dekanoát (15,0g) vízmentes DMF-da! (500 ml) készült oldatát nitrogéngáz alatt környezeti hőmérsékleten 25 óráig keverjük. Ezután az elegyet 60°C-on 5 óráig, vagy pedig addig keverjük, amíg a TLC a reakció befejeződését nem jelzi. A reakcióelegyet vákuumban körülbelül 200 ml-re bepároljuk és 1,2 liter Et20/to!uol (5:1) eleggyel keverjük. A terméket szűréssel elkülönítjük, Et20- -val mossuk és vákuumban szárítjuk. 15,05 g NTrp-/n -dekanoil/-Nom-t-BOC-A-21978C mag köztiterméket kapunk (1 általános képlet: R = n-dekanoil, R1 = H, R2 = t-BOC). C. Az Nrrp-/n-dekanoiI/-Nprn-t-BOC-A-2l978C mag tisztítása Az Nrrp-/n-dekanoil/-Nor,i't-BOC-A-21978C mag köztiterméket a következő módon tisztítjuk: a nyers készítményt körülbelül 50 ml eluáló oldószerrendszerben oldjuk(és az oldatot HPLC-vel tisztítjuk, fordított fázisú szi•!ikagé!/Clg adszorbenssel töltött patront tartalmazó Waters Prep 500 rendszert használva. A rendszert 0,2% piridinl és 0,2% ecetsavat tartalmazó H20/Me0H/CH3CN (50:15:35) eleggyel eluáljuk. A frakciókat UV monitorral detektáljuk 280 nm hullámhosszon. A megfelelő frakciókat egyesítve és vákuumban szárítva 8,56 g tisztított NT^-/n-dekanoil/-N»r,rt-BOC-A-21978C magot kapunk. D. Az Norn-t-BOC csoport eltávolítása A t-BOC csoport eltávolítása céljából az NrrP-/n-dekanoil/-Ní?r„-t-BOC-A-21978C magot (1,47 g) 15 ml trifluor-ecetsav/l,2-etándiol (10:1) elegyben környezeti hőmérsékleten 3 percig keverjük. A reakcióelegyet vákuumban megszárítjuk és a maradékot Et20-val (50 ml) trituráljuk. 20 ml Et20-val való mosás után a triturait anyagot vákuumban megszárítva 2,59 g nyers NrrP-/n-dekanoil/-A-21978C 27 27.példa magot kapunk (1 általános képlet: R = n-dekanoil; R1 és R2 — H). E. Az NnP-/n-dekanoil/-A-21978C mag tisztítása A nyers Nrrp-/n-dekanoil/-A-21978C magot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk a következőképpen: a mintát (2,59 g) 4,0 ml H20/ /MeOH/CHjCN/piridtn/HOAc (50.15:35:2.2) elegyben oldva LP-1/CIB adszorbenssel megtöltött 83 x 2,54 cm-es rozsdamentes acéloszlopba injektáljuk. Az oszlopot a fenti oldószerrel eluáljuk. Az elúciót 10-12 ml/min áramlási sebességgel hajtjuk végre LDC kétdugatytyús szivattyút (Milton-Roy) használva. Az effluenst UV detektorral (Isco Model UA-5, Instrument Specialist Co., 4700 Superior Avenue, Lincoln, NB 68504) detektáljuk 280 nm-nél. 2 percenként frakciókat (20-24 ml) gyűjtünk. A kívánt frakciókat—mikróbaellenes hatékonyságuk alapján — egyesítve és vákuumban szárítva 1,05 g terméket kapunk. E tisztítási eljárást 4,35 g, 4,25 g, 2,14 g, 2,00 g és 1,75 g nyers kiindulási származékkal megismételve összesen 5,58 g tisztított NTvp-/n-dekanoil/-A-21978C magot kapunk. 28. példa NTrp-/n-Dekanoi 1/-N«„-/ n-dekanoil /-A-2I978C (21. vegyület) Az Nr,p-/n-dekanoil/-Njfm-/n-dekanoil/-A-21978C mag (1 általános képlet: R és R1 = n-dekanoil; R2 = H) kis mennyiségben keletkezik a 27. példában leírt N7vP-/n-dekanoil/-származék előállításakor. Az E. fejezetben leírt fordított fázisú HPLC tisztítás folyamán izoláljuk. A kívánt frakciókat egyesítve és vákuumban szárítva 211 mg nyersterméket kapunk. A vegyületet analitikai HPLC-vel/Cl8 Microbondapak, Waters Co./ tisztítjuk, HsO/ /CHsCN/NH4OH/HOAc (6:23:15:0,5:0,5) eluens rendszert használva (32 ismétlés, minden injektált minta 500 f*g). 4,4 mg NTrP-/n-dekanoil/-N*in-/n-dekanoil/-A-21978C magot kapunk, melyet 360 MHz-es H~-NMR-rel azonosítunk. 29. példa Nrrp-Cbz-N(?^-Lauroil-A-21978C mag (20. vegyület) E módszernél az Np„-t-BOC-A-21978C mag triptofánjának alfa-aminocsoportját Cbz-csoporttal védjük meg, majd a t-BOC csoportot eltávolítjuk és a triklór-fenil-lauroil-észíerrel acilezünk (az ornitin alfa-aminocsoporíján). A. Nrrp-Cbz-Nor„-t-BOC-A-21978C mag előál 1 í tàsâ ÏWLBOC-A-21978C magot (1,0 g) DMF- ban (150 ml) oldunk, és az oldatot 60°C-ra melegítjük. N,0-bisz/trimetil-szilil/-acetamidot (0,55 ml), majd benzil-pentaklór-fenilkarbonátot.(257 mg) adunk hozzá. 20 órai keverés után a reakciókeveréket mintegy 20- -25 ml térfogatra bepároljuk. Vizet (100 ml) adunk hozzá és az oldat pH-ját In nátrium-28 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 15
