192993. lajstromszámú szabadalom • Eljárás albicidin antibiotikum előállítására
192393 10 Staphylococcus aureus S13E 0.4 Staphylococcus epidermidus EPI1 1.6 Staphylococcus epidermidus 222 25+ Streptococcus pyogenes C203 0.8 Streptococcus pneumoniae Park 25+ Streptococcus D csoport X66 25+ Staphylococcus D csoport 2041 25+ Haemophilus influenzae C.L 0.05 Haemophilus influenzae 76 -0.001 Escherichia Coli N10 0.05 Escherichia Coli EC14 0.1 Escherichia Coli TEM 0.012 Klebsiella pneumoniae X26 25+ Klebsiella pneumoniae KAE 0.2 Klebsiella pneumoniae X68 25+ Enterobacter aerogenes C32 25+ Enterobacter aerogenes EB17 0.1 Enterobacter cloacae EB5 25+ Enterobacter cloacae 265A 25+ Salmonella typhi X514 0.8 Salmonella typhi 1135 0.2 Pseudomonas aeruginosa X528 1.6 Pseudomonas aeruginosa X239 25+ Pseudomonas aeruginosa PS 18 25+ Pseudomonas aeruginosa PS72 1.6 Serratia marcescens X99 25+ Serratia marcescens SE3 25+ Shigella sonnei N9 0.012 Proteus morganii PR15 0.2 Proteus inconslans PR33 25+ Proteus rettgeri C24 25+ Citrobacter freundii CF17 25+ Acinetobacter calcoaceticus AC12 '25+ Id 15 20 25 30 35 vélfoltosság-megbetegedés jellegzetes tüneteit mutató H58-8029 és H60-6314 cukornádfajták szár- és levélszöveteiból. Szacharóz-pepton táptalajt és ..minimal medium"-ol szükség esetén 1,5% Difco Bacto agarral szilárdítunk meg. A szacharóz-pepton táptalaj összetételét fentebb megadtuk, míg a »minimal medium'* összetétele az alábbi: Alkotórészek gramm/liter Szacharóz 5-20 L-Metionin 0.1 KiHPO* 3 NaHiPO» 1 NHiCl 1 MgS0«.7H20 0.3 Mindegyik törzs sejtjeit szacharóz-pepton lemezekre csepegtetjük steril fogpiszkáló segítségével, és a beoltott lemezeket 28 #C-on 5 napig inkubáljuk. A lemezekre »glucose minimal A medium "-ban felvett, log-fázisban levő E. coli sejteket (2 ml; 2.107 sejt/ml] (Miller J. H., »Experiments in molecular genetics”, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Sring Harbor, NY) és 2 ml 65 #C-on megolvasztott 2% „Difco Noble Agar"-t rétegzünk. A lemezek gátlási zónáit 12 h múlva értékeljük 37 #C-08 inkubálás után. l> A +jel jelentése „nagyobb mint" és a - jel jelentése „kisebb mint” A találmány szerint hatóanyagként albicidinl tartalmazó gyógyszerkészítményeket is előállíthatunk. Az albicidin helyileg alkalmazható fertőtlenítő készítményekké formálható. Mintegy 1-20% albicidint tartalmazó folyékony készítmények alkalmas poláris oldószerrel vagy oldószereleggyel állíthatók elő. Például az antibiotikumból oldatot metanollal, vagy etanollal és dimetil-szulfoxiddal készíthetünk. Az oldatok alabilizátort, antioxidánst, oldódást elősegítő anyagot és puffereket is tartalmazhatnak. Az albicidin-készílmények a bőrön alkalmazhatók vágások, dörzsölések, zúzódások, pörsenések, égési sebek fertőzéseinek gyógyítására vagy megelőzésére. A következő példák a találmány további ismertetésére és leírására szolgálnak. 40 45 50 55 2. példa X. albilineans LS20 mutáns NRRL B-15550 előállítása A természetes LS2 izolátum sejtszuszpenzióját a mutagén N-metil-N'-nitro-N-nitrozo-guanidin (NG) 40 pg/ml koncentrációjával kezeljük 10 másodpercig 24 °C-on. A sejteket centrifugáléssal összegyűjtjük és mossuk a mutagén anyag eltávolítása céljából. 20-60%-os pusztulás következik be. A sejteket újraszuszpendáljuk, lemezre visszük és meghatározzuk E. Coli elleni aktivitásukat, a lemezek 1. példában leírt felülrétegzése útján. 3. példa Albicidin termelése 1. példa QQ XanthomonaB albilineanB izolálása cukornádból X. albilineans izolátumokat Persley fen- gg tebb idézett leírása szerint állítunk elő a le-2,8 literes Fernback-lombikban levő 1 1/2 liter szacharóz-pepton táptalajt beoltunk az X. albilineans LS20 mutáns NRRL B-15550-nel és a beoltott tápközeget forgó rázógépen (200 fordulat per perc) 96 óráig 28 °C-on rázatva inkubáljuk. A sejteket lecentrifugáljuk és a felúlúszót Amberlile XAD-7 gyantán 6
