192989. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fiziológiailag aktív hormon készítmények előállítására
10 192989 11 megfelelően az EB01 - hCS komplexek eseté- meg, mint a hasonló hGH komplexeknél, ben jelentősen kisebb aktivitást határoztunk 1. Táblázat Antitest F ab fragmens - hGH komplex hatása a szulfát-felvételre Antitest (jug) Hormon (m9) EB01 hGH (160) hGH (160) hGH (160) hGH (160) hGH (160) hGH (160) hGH (160) hCS (160) hGH (80)+hCS (80) hGH (80)+hCS (80) PBS lg (200) lg (20) F ab (20) F ab (20) F ab (20) F ab (20)+Ig (200) lg (200) lg (200) lg (200) Anti-egér Ig “SO*2" felvétel dpm/mg ± SD _ 1640 ± 160-4280 ± 300-2500 ± 400-2700 ± 120* TC 187 (12) 2300 ± 100 R-Poly (6) 2000 ± 100-4880 ± 190-1200 ± 70-3820 ± 250 R-Poly (5) 4250 ± 500 600 ± 75 Törpe egerekbe (n = 6) kétszer hormon + antitest komplexeket tartalmazó készít- 25 ményt injekcióztunk (0 és 24 óra), majd 48 óra elteltével 35S042'-ot. A kiértékelést 72 óra elteltével végeztük. TC187 = patkány monoklón anti-egér L-lánc; R-Poly = nyúl pliklón anti-egér lg. 30 * p < 0,001 összehasonlítva csak hGH-val. Növekedés fokozása fiatal BALB/c egereknél Mivel a növekedés fokozása törpe egerek esetében igen alacsony aktivitású há- 40 térrel mutatkozott, érdekesnek mutatkozott megvizsgálni, hogy az antitestek által közvetített fokozó hatás kimutatható-e normál, azaz gyorsan növekvő fiatal egerek esetében. Háromhetes BALB/c, 7-10 g súlyú egereket 45 véletlenszerűen elrendeztük és az előzőekben, a törpe egereknél leírt módon kezeltük. A súlyukat hetente háromszor mértük. Az 1-es csoport a kísérletek Ideje alatt végig hetente kétszer PBS-t, a 2-es csoport egy héten át heti három alkalommal 160 m9 hGH-t, a 3-as csoport 4 héten keresztül heti három alkalommal ugyanilyen mennyiségű PBS-t, a 4-es és 5-ös csoport illetve a 4 héten keresztül heti három alkalommal 160 m9 hGH/200 jug EB01 komplexet kapott és a 6-os csoport ugyanezt a komplexet kapta 4 héten keresztül minden nap. Az 5-ös és 6-os csoportnál 31 illetve 3736-os súlygyarapodást mértünk a kontrollcsoporthoz viszonyítva (2. ábra). A hGH-EB01 komplex jelentősebb hatása az adagolást követő 48 órában jelentkezett legkorábban (2. táblázat). Azok az állatok, amelyek EB01 jelenlétében 10, 40 illetve 160 jug hGH-t kaptak, jelentős súlygyarapodást mutattak a csak hGH-val kezelt állatokhoz viszonyítva. 2. Táblázat hGH - EB01 komplexszel kezelt fiatal BALB/c egerek súlygyarapodásának rövididejű vizsgálata hGH m9 hGH-EB01 komplex Relatív súlygyarapodás P (1600/200 m 9) 35 ± SD-13.0 ±11.0 10-16.0 ± 12.0 + 27.0 ± 6.0 < 0.050 40-16.0 ±11.0 + 29.0 ± 8.0 < 0,050 160-13.0 ± 13.0 29.0 ± 11.0 < 0.025 Háromhetes egereket (Wto = 8 ± 1,0) 0 testsúly gyarapodást a 48. órában határoztuk és 24. órában kezeltünk. A 36-ban kifejezett meg. 7
