192955. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alkoxi-benzoil-csoporttal acilezett A- 21978C ciklusos peptid-származékok előállítására
13 192955 14 Quantum Industries, 341 Kaplan Drive, Fairfield, N. J. 07006) töltetet tartalmazó, 4,7x xl92 cm-es oszlopra szivattyúzzuk. Az oszlopot a fenti oldószerrendszerre! eluáljuk. 350 ml-es frakciókat gyűjtünk. Az elválasztást 280 na hullámhosszon UV-monitorral detektáljuk. A magot tartalmazó frakciókat egyesítve, az oldószereket vákuumban lepárolva és gyorshűtéssel szárítva 5,2 g tisztított A-21 978C magot kapunk. E. Az A-21 978C ma g jellemzői (a) Alak: fehér amorf szilárd anyag, mely rövidhullámú UV fényben fluoreszkál. (b) Tapasztalati képlet: CsíHBsNnOís (c) Molekulasúly: 1465 (d) Oldhatóság: vízben oldódik (e) Infravörös (IR) abszorpciós spektrum (KBr) maximumok: 3300 (széles), 3042 (gyenge), 2909 (gyenge), 1655 (erős), 1530 (erős), 1451 (gyenge), 1399 (közepes), 1222 (közepes), 1165 (gyenge), 1063 (gyenge) és 858 (közepes - gyenge) cm*1. (f) UV abszorpciós spektrum (metanolban) maximumai: 223 nm (e 41,482) és 260 nm (e 8,687). (g) Elektrometikus titrálás (66% vizes DMF): 4 titrálható csoport mutatható ki, melyeknek pKa értéke körülbelül 5,2; 6,7; 8,5 és 11,1 (kezdeti pH 6,12). 2. preparálás Alternatív eljárás az A-21 9780 mag előállítására Az A-21 978C magot az 1. preparálásban leírt módon állítjuk elő, kivéve bizonyos változtatásokat a B. fejezetben. Az A. utahensis tenyészetet először mintegy 48 óráig inkubáljuk; a szubsztrát félig tisztított A-21 978C komplex (50 g); a szubsztrát hozzáadása után az inkubálási idő körülbelül 16 óra. A szűrt levet 3,1 liter HP-20 gyantát tartalmazó oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot 10 térfogat vízzel mossuk, majd víz/ac.etonitril (95:5) eleggyel eluáljuk. Az eluciót az 1. preparálásban leírtak szerint detektáljuk. 24 liter összegyűjtése után az eluenst kicseréljük viz/acetonitril (9:1) elegyre. A magot tartalmazó frakciókat ezzel az oldószerrel eluáljuk. E frakciókat egyesítjük, az acetonitril eltávolítása céljából vákuumban bepároljuk és gyorshűtéssel szárítjuk. 24,3 g félig tisztított A-21 978C magot kapunk. E félig tisztított magot (24,3 g) vízben (400 ml) oldjuk. Az oldatot 0,2% ecetsavat és 0,8% piridint tartalmazó víz/metanol/acetonitril (8:1:1) eleggyel készült 3,33 liter szilikagá: (Quantum LP-1) (Cia töltetet tartalmazó, 4,7x192 cm-es acéloszlopra szivattyúzzuk. Az oszlopot a fenti oldószerrel körülbelül 13 750 kPa nyomáson eluáljuk, 350 ml-es frakciókat gy üjtve. Az elúoiót 280 nm-nél UV monitorra! detektáljuk. A magot tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószereket vákuumban lépőre Íjuk és a maradékot gyorshűtéssel szárítja k. 14 g nagytisztaságú A-21 978C magot kapunk. 3. preparálás Nom-t-BOO—A—21 9780 Ci és Ci faktorok előállítása A-21 978C C2 és C3 faktorok keverékét (10 g) (előállítva a 4 208 403 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint) vízben (50 ml) oldjuk szonikálás közben .200 mg per ml). Az oldat pll-ját 4,05-ről 9,5-re állítjuk be 5n nátrium-hidroxid-oldat ,3,6 ml) segítségével. Di-tere-butil-dikarbonátot (3,0 ml) adunk hozzá és a reakcióslegyet szobahőmérsékleten 2 óráig keverjük. Az elegy pH-ját 9,5-ön tartjuk 5n nátrium-hidroxid-oldat kézi hozzáadásával (6,5 ml lúghozzáadás 2 óra alatt). A reakciót időnként szilikagél TLC-vel ellenőrizzük acetonitril/víz (7:3 és 8:2) oldószerrendszert használva és UV fénybem detektálva. Körülbelül 10 perc. múlva az oldat gyorsan megzavarosodik és a lúgfogyasztás emelkedik. 30 perc múlva csökken a zavarosáig sebessége és a lúgfogyasztás üteme, a reakció végét jelezve. Ennek ellenére a reakciót még 90 percig folytatjuk a teljes átalakulás biztosítása céljából. 2 órai reagáltatás után a képződött anyagot azonal liofilizálva 12,7 g Nor,.-t-BOC-A-21 978C C2 és C3 faktort kapunk. Hasonló eljárást alkalmazva két 10 g-os és egy 30 g-os reakciót is indítunk. Ezeknél a reakcióidő csak 40 perc. A két 10 g-os kísérletből 11,9 illetve 12,1 g terméket kapunk. A 30 g-os reakció 35,4 g terméket eredményez. 4. preparálás A 21 9780 Nom-t-BOC mag előállíta'sa A. A. utahensis fermentációja Az A. utahensis fermentációját az 1. preparálás A. fejezetében leírtak szerint hajtjuk végre, ferde A. táptalajt és I. szaporító táptalujt használva és a szaporító táptalajt mintegy 66 óráig inkubálva. B. Norn-t-BOO komplex dezacílezése 5 10 15 20 25 30 35 40 45 53 55 60 65 8
