192955. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alkoxi-benzoil-csoporttal acilezett A- 21978C ciklusos peptid-származékok előállítására
9 192955 10 használandó vegyület és a kezelendő fertőzés természete és súlyossága. Az alkalmazandó dózis-tartományokat vagy dózis-egységeket a szakember előtt ismert módon a MIC (minimális gátló koncentráció) és az LDso (hatásos dózis 50%-a) érték, a toxicitási adatok, valamint egyéb, példái farmakokinetikai tényezők, a beteg (gazdaszervezet) és a fertőző mikroorganizmus jellemzői figyelembevételével határozzuk meg. A találmány teljesebb bemutatására szolgálnak az alábbi példák, anélkül, hogy a találmány hatókörét korlátoznák. 1. Preparálás A-21 978C mag preparálása A. Aotinopianes utahensis fermentációja Perde agaron Actinoplanes ntahensis törzstenyészetet készítünk és tartunk fenn. Ferde agar táptalajként a következők egyikét használjuk: A táptalaj Komponensek Mennyiségek Előfőzött zabliszt 60.0 g Élesztő 2.5 g K2HPO4 1.0 g Czapek-féle ásványi törzsoldat* 5.0 ml Agár 25.0 g Ionmentesített víz 1 literig Autoklávozás előtt a pH körülbelül 5,9; a pH-t nátrium-hidroxiddal 7,2-re állítjuk be; autoklávozás után a pH körülbelül 6,7. A Czapek-féle ásványi a következő: törzsoldat összetétele Alkotórészek Mennyiség PeSOi.7HaO (2 ml konc. HCl-ban oldva) 2 g KC1 100 g MgS0«.7H20 100 g Ionmentesitett víz 1 literig B, táptalaj Alkotórészek Mennyiség Burgonya-dextrin 5.0 g Élesztőkivonat 0.5 g Enzimatikus kezain-5.0 g -hidrolizátum* Marhahúskivonat 0.5 g Glükóz 12.5 g Kukoricakeményítő 5.0 g Hús-pepton 5.0 g Melasz 2.5 g MgS04.7H2 0.25 g CaCoa 1.0 g Czapek-féle ásványi 2.0 ml törzsoldat Agar 20.0 g Ionmentesitett víz 1 literig *N-Z-Amine A, Humko Sheffield Chemical, Lyndhurst, NJ. A ferde agart beoltjuk Actinoplanes utahensis NRRL 12 052 mikroorganizmussal és 30 °C-on 8-10 napig inkubáljuk. A ferde agaron nőtt tenyészet felével beoltjuk a következő összetételű 50 ml vegetatív táptalajt: Alkotórészek Mennyiség Előfőzött zabliszt 20.0 g Szacharóz 20.0 g Élesztő 2.5 g Szárított szeszgyári 5.0 g gabonatör köly* K2 HPO4 1.0 g Czapek-féle ásványi 5.0 ml törzsoldat Ionmentesitett víz 1 literig A pH-t nátrium-hidroxiddal 7,4-re állítjuk be; autoklávozás után a pH körülbelül 0,8. *National Distillers Products Co., 99 Park Ave., New York, N. Y. A beoltott vegetatív táptalajt 250 ml-es bőnyakú Erlenmeyer-lombikban 30 °C-on mintegy 72 óráig inkubáljuk, 5 cm átmérőjű ív körül percenként 250 forgást végző rázógépen. A fenti inkubált vegetatív táptalajjal 1 özvetlenül beoltunk egy második fokozatú vegetatív táptalajt. Előnyösen félretehetjük későbbi felhasználáshoz, a tenyészetet folyékony nitrogén gőzfázisában tartva. Ilyen tároláshoz a tenyészetet több kis fiolában állítjuk elő a következőképpen: mindegyik fiolába bemérünk 2 ml beoltott vegetatív táptalajt és 2 ml glicerin/laktóz oldatot ÍW. A. Dailey és C. E. Higgins, „Preservation and Storage of Microorganisms in the Gas Phase o' Liquid Nitrogen", Cryobiol. 10, 364-367 (1973)1. Az előállított szuszpenziókat a folyékony nitrogén gőzfázisában tároljuk. Az így elkészített tárolt szuszpenziót (1 ml) használjuk 50 ml első fokozatú végété tív táptalaj beoltására (melynek összetételét fentebb megadtuk). A beoltott első foko- Zc tű vegetatív táptalajt a fentiek szerint inkubáljuk. Nagyobb térfogatú inokulum előállítása céljából az inkubált első fokozatú vegetatív táptalaj 10 ml-ével beoltunk 400 ml második fokozatú vegetatív táptalajt, melynek összetétele azonos az első fokozatúéval. A második fokozatú táptalajt 2 literes bőnyakú Erlenttií yer-loinbikban 30 °C-on 48 óráig inkubál-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
