192918. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorellenes hatású N-6-[(2-amino-2-karbamoil-etil)-amino-metil]-piridin-2-karbonil-3-terc-butoxi-hisztidin-terc-butil-észter előállítására
5 192918 6 T. táblázat Az oxigén -aktiváló képesség összehasonlító vizsgálata Vegyület Mért érték A mért jel erősítése Spinkoncentráció Viszonylagos érték PYML (kontroll) 63.1 1250 5.048.10-2 1.00 PYML 4 (találmány szerinti vegyület) 99.3 500 1.986.10-2 3.93 A táblázatban fetüntetett mérési eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerinti vegyületnek jelentős oxigén-aktiváló képessége van {3,9-szerese a PYML kontrollvegyületének). így várható, hogy a találmány szerinti vegyület a DNS kettős spirálját felhasítja és kedvező tumorellenes hatással rendelkezik. Találmányunkat az alábbi példák segítségével illusztráljuk. 1. példa a) A (III) képle tű BHBE szintézise 26.3 mg (0,063 mmól) N-benzil-oxi-karbonil-BHBE-t 2 ml 10% ecetsavat tartalmazó metanolban feloldunk. A műveletet argon védőgázatmoszférában végezzük. Az oldathoz 30 mg palládiumfeketét (Pd-katalizátort) adunk, és az elegyet két órán keresztül visszafolyató hűtő alkalmazáséval forraljuk. Ezután szobahőmérsékleten egy további órán át rázatjuk az elegyet, majd a palládiumfeketét leszűrjük. A szürletet 30 °C hőmérséklete alatt betőményítjük. Miután a metanol egy jelentős részét desztillációval eltávolítjuk, 10 ml heptánt öntünk az elegyhez, amelynek hőmérséklete nem éri el a 30 °C-ot, s ezáltal a hangyasav azeotrópos desztillációjának körülményeit teremtjük meg. Miután a fenti műveletet négyszer megismételjük, 2 ml toluolt adunk a bepárlási maradékhoz és az elegyet szárazra pároljuk. A szilárd maradékra 1 ml 0,3 n sósavoldatot öntünk. A kapott oldatot 30 °C alatti hőmérsékleten betöményítjük. 5 ml toluollal háromízben azeotrópos desztillációt végzünk, és a maradékot szárazra bepároljuk. Ily módon a BHBE-dihidrokloridot fehér hab formájában kapjuk meg. b) Y helyében Nps-t tartalmazó (IV) általános képletű vegyület előállítása 658.3 mg (2,96 mmól) HPyCME-t argonatmoszférában 20 ml acetonitrilben feloldunk. Ehhez az oldathoz 3,5 g aktivált, 3Ä-ÖS molekulaszűrőt adunk és 601,6 mg (2,96 mmól) 20 ml acetonitrilben feloldott Boc-DAPA-t hozzáöntünk, majd az elegyet szobahőmérsékleten erőteljesen keverjük. Éjszakai állás 20 után a 38 -ős molekulaszűrőt Celite-n átszűrve eltávolítjuk és a szűrletet betőményítjük. Ily módon hozzávetőleg 1 kg Schiff-bázist kapunk sárga hab formájában. Anélkül hogy megtisztítanánk, a Schiff-bázist 50 ml meta- 25 nolban feloldjuk, s az oldatba légköri nyomáson, 100 mg 10% fémtartalmú szénhordozós palládium katalizátor jelenlétében, hidrogéngázt vezetünk be 3 órán keresztül. A szénhordozós palládiumkatalizátort szűréssel 30 eltávolítjuk, a szűrletet betőményítjük, majd a maradékot oszlopkromatográfiás módszerrel tisztítjuk. Az oszlop anyaga szilikagél, az eluálószer összetétele: metanol/diklór-metán = 1/19. Az ilyen módon kapott termék, a 35 Boc-DAPAPy, 120 mg mennyiségben (0,341 mmól) halványsárga színű hab alakjában jelenik meg. A terméket 3 ml diklór-metánban feloldjuk és az oldathoz cseppenként, 0 °0 hőmérsékleten, 3 ml TFA-t (trifluor- 40 -ecetsavat) adagolunk. Az elegyet 0 °C-on 10 percig keverjük, majd a keverést szobahőmérsékleten további 50 percig folytatjuk. A reakcióelegyet bepároljuk, a bepárlási maradékot 5 ml diklór-metánban oldjuk. Ehhez az 45 oldathoz 0,214 ml trietil-amint (4,5 mól ekvivalens) és 84,4 mg Nps-Cl-t (1,3 mól ekvivalens) adunk 0 °0 hőmérsékleten és az elegyet szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 10 ml 50 diklór-metánnal hígítjuk és a szerves fázist 15 ml vízzel átöblítjük. A vízzel mosott szerves fázist vízmentes nátriumszulfátra öntve megszárítjuk és betőményítjük. A bepárlási maradékot szilikagél oszlopon kromatografál- 55 juk, eluálószerként etil-acetátot használva. Ily módon 121,9 mg (0,218 mmól) 6-íí(S)-2- -Nps-amino-2-karbamoil-etill-NpB-amino-metill-piridin-2-karbonsav-metil-észtert (a továbbiakban: „N,N’-diNpsAOAPyC”) kapunk. g0 Az előállított vegyület azonosításéra szolgáló fizikai paraméterek: (cc)d23 = +13,4 (C = 1,0; CHCU) tömegspektrum: m/z = 561 (M* + 1), 407 (M* - Npys) gg ‘HNMR (ODCb; TMS): 3,36-3,74 (2H, m), 3,89 (3H, s) 3,80-4,04 (1H, m), 4,80 (2H, s/m), 5,24 4
