192864. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új lipopeptidek előállítására
27 192864 28 diimidet. A reakcióoldatot 16 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk és utána vákuumban szárazra pároljuk, majd a maradékot 50 ml metanollal 50°-on elkeverjük. Ily módon kristályos frakciót kapunk és az anyalúgból egy második frakció kristályosodik ki. A két frakciót etil-acetátból még egyszer átkristályosítjuk. Ily módon színtelen kristályokat kapunk, amely a palmitoil-Cys(2- f Rl,3-dipalmitoiloxi-propil)-Ala-D-Glu(Ala-OBzl-NHí. Op. 180-184». Rf=0,61 (CHCU:EtOH=9:l). c) A tripeptiddel való kapcsoláshoz alkalmazott palmitoil-Cys(2rRl,3-dipalmitoiloxi-propil) vegyületet az le) példában leírt módon kapjuk a megfelelő benzhidril-észterből színtelen, kristályos anyag alakjában. Op. 71-75». Rf=0,45 (CHCl3:MeOH=9:l). [oc]djo=-4» (dioxán; c=0,89). 3. példa 3 mg palmitoil-Cys(2[R],3-dilauroiloxipropil)-Ala-D-Glu-NH2 lipopeptidet (1. példa) 27 mg lecitinnel együtt feloldunk 2:1 arányú kloroform/metanol-elegyben. Az elegyet ezután rotációs bepárlón vákuumban bepároljuk, így egy lípid-filmet kapunk. Ehhez a filmhez hozzáadunk 0,2 ml 0,9%-os steril, pirogénmentes NaCl-oldatot. Ezután az oldatot 2 percig besugározzuk szobahőmérsékleten és így buborékos lipid-szuszpenziót (liposzoma) kapunk, amelynél a buborék körülbelül 1-5 mikron átraérőjüek, amelyek a lipopeptidet tartalmazzák. Ezt a szuszpenziót szubkután vagy intraperitoneálisan beadhatjuk egereknek 0,1 ml/10 g testsúly adagokban. Hasonló gyógyszerkészítményeket embereknek való beadásra analóg módon állíthatunk elő. 4. példa 500 mg (0,34 mmól) palmitoil-Cys(2[R1,3- -dilauroiloxi-propil)-Ala-D-Glu(Lys/Boc/Lys/Boc/-OMe)-NH2-ot feloldunk 5,3 ml 1,7 n abszolút ecetsav-etilészteres sósav és 12 ml abszolút metilénklorid elegyében. Az oldatot 1 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk, utána szárazra pároljuk és ezt a folyamatot háromszor megismételjük 10-10 ml metil-terc-butiléterrel. A maradékot acetonnul eldórgöljük, a csapadékot leszívatással elkülönítjük és a folyamatot meleg ecetsav-etilészterrel megismételjük, a leszívatás előtt azonban ugyanolyan térfogatnyi acetont még hozzáadunk. Ily módon palmitoil-Cys(2f Rl,3- -dilauroiloxipropil)Ala-D-Glu(Lys-Lys-OMe)-NH2 2 HC1 vegyületet kapunk színtelen kristályok alakjában 0,5 mól kristályvíztartalommal. Op. 250-260® (bomlik). [cc1dí0= -18°±1 (ClICh:MeûH=l: 1 ; c=0,849). Rf=0,22 (CHCl3:Me0H:H20:ecetsav=75:25:2:2). A kiindulási anyagot a következő módon állítjuk elő: 4.1 lépés 1 g (1,002 mmól) palinitoil-Cys(2íRl,3-dilauroi’oxi-propil)-Ala-D-Glu-NH2-ot, 0,15 g N-hidrcxi-benztriazolt, 0,15 g N-hidroxi-szukcinimi let és 0,5 g diciklohexil-karbodiimidet 3 óra hosszat együtt keverünk szobahőmérsékleten 5 ml diinetil-formamidból, 20 ml kloroformból és 5 ml ac.etonitrilből álló elegyben. Ezután 0,55 g (1,05 mmól) Lys/Boc/-Lys/3oc/-0Me-HCl-t és 0,3 ml trietilamint adunk az elegyhez, amelyet 40 óra hosszat szobahőmérsékleten melegítünk és utána vákuumban bepároljuk. A maradékot 20 ml vízzel eldörzsöljük és leszívatjuk, majd ezt metanollal megismételjük és a visszamaradó csapadékot metanolból átkristályosítjuk. Ily módon színtelen kristályokat kapunk, amely a palmitolil-Cys(2f Rl,3-dilauroiloxi-propil)Ala-D-Glu(Lys/Boc/-Lys/Boc/-0Me)-NH2 vegyület. Op. 180-182». [oc1dío--25»±1® (CHCb c=l,395). Rf=0,61 <CHCl3:MeOH=9:l). ő. példa 1 g (1,002 mmól) palmitoil-Cys(2f Rl,3-dilauro loxi-propil)-Ala-D-Glu-NH2-ot, 0,23 g N-hidroxi-szukcinimidet, 0,07 g N-hidroxibenztriazolt és 0,52 g diciklohexil-karbodiimidet feloldunk 15 ml abszolút dimetil-acetamidban és az oldatot 5 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután 0,274 g glicilfaurin és 173 pl tetrametil-guanidin 10 m’ dimetil-acetamiddal készített oldatát adjul: az oldathoz. Az elegyet 24 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk és ezen a hőmérsékleten hozzáadunk további 100 mg diciklohexil-karbodiimidet, 100 mg N-hidroxi-szukcinimidet, 50 mg glicil-taurint és 90 pl tetrametilguanidint. Az elegyet 24 óra hoszszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk és utána feldolgozzuk oly módon, hogy vákuumban aepároljuk, a maradékot előbb 50 ml hexánnal, utána 30 ml acetonitrillel mossuk, 20- -20 ml telített NaCl-oldattal 3-szor digeráljuk 40°-cn és a maradékot 85:15:1 arányú CHCI3- (MeO 4)víz-elegyben 40°-on oldjuk, majd kovasavgélen kromatografáljuk, az eluálást savgélen kromatografáljuk, az eluálást 70:30:3 arányú CHCbfMeOHlviz-eleggyel végezzük. Az eluátumot vákuumban bepároljuk és így palmitoi'-Cys(2f Rl,3-dilauroiloxi-propil)-Ala-D-Glu Gly-taurin-nátriumsó)-NH2x0,82 H2O vcgyülotet kapunk. fcclDJ1--24® (CHCl3:MeOH=l:l c=l,052). Rf=0,256 (CHCb:MeOH=8:2). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 15
