192842. lajstromszámú szabadalom • Eljárás affinitás-szorbensek előállítására
Il 192842 12 térfogatarányú trifluor-ecetsav : diklór-metán elegyben azuszpendáljuk, és a szuszpenziót 2 órán ét gyengén rázzuk. 2 óra elteltével a gólt leszűrjük, és vízmentes diklór-metánnal kétszer, csökkenő mennyiségű (95, 80, 60, 40, 20, 10, 5 térfogatit) diklór-metán - -aceton eleggyel egyszer-egyszer, végül vízmentes acelonnal kétszer mossuk. A mosáshoz minden esetben a géllel azonos térfogatú mo- BÓfolyadékot használunk. Ezután a gélt az 1. példában leírtak szerint rehidratáljuk, és a rehidratált gélt az 1. példában megadott körülmények között tároljuk. A D-5-hidroxi-triptofán koncentrációja a hordozón (az 1. példában ismertetett UV spektrofotometriás módszerrel mérve): 2,2xl0'3 mól/liter. 4. példa 1,5 millimól (530 mg) N^,Nl*-di-terc-butoxi-karbonil-D-hisztidint 1 ml, előzetesen nitrogénnel átbuborékoltatott vízmentes dimetilfor mamid ban oldunk. Az oldatot -10 °C-ra hűtjük, 1,5 millimól (210 /ul) vízmentes trietilamint és 1,5 millimól (195 pl) klórhangyasavizobutil-észtert adunk hozzá, és 5-10 percig -10 °C-on keverjük. A képződött vegyes anhidridet elkülönítés nélkül adjuk a 3. példában közöltek szerint előkészített amino-hexilagaróz hordozóhoz, és a következőkben is a 3. példában leírtak szerint járunk el. A polimer hordozóhoz kötött D-hisztidin mennyiségét merkapto-etán-szulfonsavas hidrolízis után automata aminosav-analízissel határozzuk meg. A D-hisztidin koncentrációja a hordozón 3,4xl0~* mól/kg. 5. példa Mindenben a 3. példában leírtak szerint járunk el, de az amino-hexil-agarózra BOC-D-Glu(0Bul)-0H és klórhangyasav-izobutil-észter reakciójával készített vegyes anhidridet viszünk fel. A polimer hordozóhoz kötött D-glutaminsav mennyiségét a 4. példában közöltek szerint határozzuk meg. A D-glutaminsav koncentrációja a hordozón: 7,95xl0-3 mól/kg. 6. példa 50 g amino-hexil-agarózt tízszer 200 ml desztillált vízzel, majd térfogatával azonos mennyiségű, növekvő koncentrációjú (5, 10, 20, 40, 60, 8054) acetont tartalmazó vizes acetonnal, ezután vízmentes acetonnal, ezt követően növekvő mennyiségű diklór-metánt (5, 10, 20, 40, 60, 80 térfogatit) tartalmazó aceton - diklór-metán eleggyel mosunk. Végül a polimert térfogatának kétszeresét kitevő mennyiségű vízmentes diklór-metánnal mossuk. Ezután a polimert vele azonos térfogatú d; klór-metánban szuszpendáljuk, és n szuszpenzióhoz 10 ml vízmentes piridint és 2 millimól (935 mg) BOCi-Lys-ONP-l adunk. A reakcióelegyet 1-3 napig szobahőmérsékleten rázzuk, majd a gélt leszűrjük. Ezután n 3. példában leírtak szerint járunk el. A polimer hordozóhoz kötött lizin mennyiségét a 4. példában közöltek szerint határozzuk meg. A lizin koncentrációja a hordozón 6,J2xlO-3 mól/kg. 7. példa 1,5 millimól (433 mg) BOG-Asp (OBu*)-OH-t 1 ml vízmentes dimeLil-formamidban oldunk. Az oldatot -10 °C-ra hűtjük, és 1,5 millimól (210 pl) vízmentes trietil-amint és 1,5 millimól (195 pl) klórhangyasav-izobutil-észtert adunk hozzá, majd 5-10 percig -10 °C-on keverjük. A képződött vegyes anhidridet elkülönítés nélkül adjuk az 1. példában leírt módon előkészített amino-hexil-agaróz hordozóhoz, A következőkben az 1. példában leírtak szerint járunk el. A polimer hordozóhoz kötött aszparaginsav mennyiségét a 4. példában közöltek szerint határozzuk meg. Az aszparaginsav koncé itrációja a hordozón 9,63xl0"3 mól/kg. 8. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk cl, de védett aminosavként BOC-tiroxinból indulunk ki. A polimer hordozóhoz kötött tiroxin mennyiségét az 1. példában leírt UV spektrofotometriás módszerrel határozzuk meg. A tiroxin koncentrációja a hordozón 3,4xl0-3 mól/liter. 9. példa 0,15 millimól (113 mg) BOC-Tyr-D-Ala-Gly-Plie-Leu-,j-amino-vajsav-OH-t 1 ml, előzetesen nitrogénnel átbuborékoltatott vízmentes dimetil-formamidban oldunk. Az oldatot -IC “C-ra hűtjük, 0,15 millimól (21 pl) vízmentes trietil-amint és 0,15 millimól (19,5 pl) klórhangyasav-izobutil-észtert adunk, és 5-10 percig -10 °C-on keverjük. A képződött vegyes anhidridet elkülönítés nélkül adjuk az 1. példában közöltek szerint előkészített amino-hexil-agaróz hordozóhoz. A vegyes anhidrid hozzáadása után a szuszpenzió pH-jét 0,01 mólos vizes nátrium-hidroxid oldattal 7,0-7,5-re állítjuk, és 4 órán át 0 ®C-on rázzuk. A pH-t óránként ellenőrizzük. 4 óra elteltével a gélt vele azonos térfogatú 2:1:2 térfogatarányú dimetil-formamid : víz : aceton eleggyel ötször, majd desztillált vízzel ötször mossuk. Ezután 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
