192842. lajstromszámú szabadalom • Eljárás affinitás-szorbensek előállítására
13 192842 ]'l a gélt az 1. példában leírtak szerint vízmentesíljük, és a továbbiakban is az 1. példában leírtak szerint járunk el. A polimer hordozóhoz kötött H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-GABA-OH (GABA = 7-amino-vajsav) mennyiségét a 4. példában közölt eljárással határozzuk meg. A H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-GABA-OH koncentrációja a hordozón l,lxl0-3 mól/kg. 10. példa 0,5 millimól (180 mg) BOCj-D-His-OH-t 1 ml vízmentes dimetil-formamidban oldunk. Az oldatot -10 °C-ra hűtjük, 0,5 millimól (70 /ul) trietil-amint és 0,5 millimól (65 pl) klórhangyasav-izobutil-észtert adunk hozzá, és 5-10 percig -10 °C-on keverjük. A képződött vegyes anhidridet elkülönítés nélkül adjuk a következőképpen előkészített hordozóhoz: 2 g Akrilex A gélt 24 órán át desztillált vízben duzzasztunk, majd ötször 100 ml desztillált vízzel és ötször 2:2:1 térfogatarányú dimetil-formamid : aceton : víz eleggyel mosunk. Végül a gélt vele azonos térfogatú 2:2:1 térfogatarányú dimetil-formamid : aceton : víz elegyben szuszpendáljuk, és a szuBzpenziót 5 °C-ra hűtjük. A vegyes anhidrid hozzáadása után a szuszpenzió pH-ját 0,01 mólos vizes nátrium-hidroxid oldattal 7,0-7,5-re állítjuk, és 4 órán át 0 °C-on rázzuk. A pH-t óránként ellenőrizzük. 4 óra elteltével a gélt vele azonos térfogatú 2:2:1 térfogatarányú dimetil-formamid : aceton : víz eleggyel ötször, majd desztillált vízzel ötször mossuk. A mosófolyadékol vízsugár-vákuumban leszívatjuk, majd a gélt kétszeres térfogatú 99%-os trifluor-ecetsavban 0 ®C-on szuszpendáljuk, és a szuszpenziót 2 órán át gyengén rázzuk. 2 óra elteltével a gélt leszűrjük, és desztillált vízzel, növekvő mennyiségű acetont tartalmazó vizes acetonnal, végül vízmentes acetonnal mossuk. A kapott terméket xerogél formájában tároljuk. A polimer hordozóhoz kötött D-hisztidin mennyiségét sósavas hidrolízis után aminosav-analízissel határozzuk meg. A D-hisztidin koncentrációja a hordozón 3,2xl0*3 mól/kg. 11. példa 0,5 millimól (150 mg) BOC-L-Glu(OBu*)-OH-t 1 ml vízmentes dimetil-formamidban oldunk. Az oldatot -10 °C-ra hűtjük, 0,5 millimól (70 pl) trietil-amint és 0,5 millimól (65 pl) klórhangyasav-izobutil-észtert adunk hozzá, és 5-10 percig -10 #C-on keverjük. A képződött vegyes anhidridet elkülönítés nélkül adjuk a 10. példában közöltek szerint előkészített Akrilex A hordozóhoz, és ezután a 10. példában leírtak szerint járunk el. A kapott terméket xerogél formájában tároljuk. A polimer hordozóhoz kötött glutaminsav mennyiségét a 10. példában leírt módon határozzuk meg. A glutaminsav koncentrációja a hordozón l,lxl0'2 mól/kg. 12. példa 0,5 millimól (157 mg) BOC-3,1-dibidroxi-fenil-szerint 1 ml, cdőzeteBen nitrogénnel átbuborékoltatott vízmentes dimetil-formamidban oldunk. Az oldatot -10 °C-ra hűtjük, 0,5 millimól (70 pl) trietil-amint és 0,5 millimól (65 pl) klórhangyasav-izobutil-észtert adunk hozzá, éB 5-10 percig -10 °C-on keverjük. A képződött vegyes anhidridet elkülönítés nélkül adjuk a 10. példa szerint elkészített Akrilex AH gélhez. A továbbiakban a 10. példában leírtak szerint járunk el. A kapott terméket xerogél formájában tároljuk. A polimer hordozóhoz kötött 3,4-dihidroxi-fenil-szerin mennyiségét az 1. példában ismertetett UV-spektrofotometriás méréssel határozzuk meg. A 3,4-dihidroxi-fenil-szerin koncentrációja a hordozón 3,75xJ0'3 mól/liter. SZABADALMI IGÉNYPONT Eljárás az (I) általános képletü affinitás-szorbensek előállítására P - A - (NH). -CO - B (I)- a képletben P 10 000 és 100 000 közötti polimerizációfokú, affinitáskromatográfiai célokra alkalmas poliszacharid-típusú hordozót, célszerűen agarózt vagy cellulózt, vagy akril-amid N-(amino-alkil)-akril-araiddal vagy akrilsav-hidraziddal képezett, divinil-vegyülettel térhálósított, 10 000 és 100 000 közötti polimerizációfokú kopolimerjét jelenti az -A(NH)mH oldallánc nélkül, A -(CHíJn-csoportot - ahol n értéke 1 és 10 közötti egész Bzám - vagy -C0- csoportot jelent, és hu A -(CHaln- csoportot jelent, m értéke 1, míg ha A -CO- csoportot jelent, m értéke 2, és B egy arainosav, polipeptid vagy neuro- Lranszmitter-karbonsav maradékát jelenti a -COOH végcsoport nélkül -, azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletű polimer hordozóhoz P - A - (N1IUII (II) - a képletben P, A és m jelentése a tárgyi kör szerinti - vegyes anhidrid-módszerrel egy (III) általános képletű aminosav, polipeptid vagy neurotranszmitter-karbon8av B - COOH (III)- a képletben B jelentése a tárgyi kör szerinti - olyan védett származékát kapcsoljuk, amely az összes amino-, heterociklusos ami-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6C 65 8
