192837. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírusszegény vetőburgonya nagyüzemi előállítására
5 Az egyes hajtások csúcshajtéskozdeményét és az alatta levő két noduBzon elhelyozkedő hajtáskezdeményt használjuk a roorisztéma izolálására. Steril preparáló eszközökkel sztereo 5 mikroszkóp alatt az egyes hajtáskozdeményeknél fokozatosan eltávolítjuk a merisztémát burkoló levélkezdeményeket. Az Így szabaddá vált 0,3-0,5 mm átmérőjű, egy-két igen kezdetleges levélprimordiumot hordozó 10 merisztéma-szövotet, a hajtástengelyre merőleges éles vágással kiemeljük a környező szövetből és a következőkben részletezett módon elkészített táptalajt tartalmazó tenyészedónybe (fiola) tesszük. Mindenegyes 15 merisztéma külön fiolába kerül. Az egész izolálási műveletet lamináris boxban végezzük. A táptalaj a Murashige-Skoog-féie táptalaj módosított változata, szerint készítjük el: , és az alábbiak 20 Mikroelem törzsoldat: mg/100 ml H3 BO3 620,0 25 MnS04 • 41120 2.230,0 ZnSCU ■ 2 H2O 860,0 NajMoO* • 2HiO 25,0 CUS0« • 5HiO 2,5 CoCU • GthO 2,5 30 EeîNai EDTA törzsoldat: mg/100 ml EeS0< ■ 7ÍH0 278,0 Ní EDTA 373,0 35 KJ törzsoldat: mg/100 ml KJ 75,0 40 Vitamin törzsoldat: mg/100 ml Nikolinsav 10,0 Thiamin HCT 100,0 Piridoxin HCl 10,0 45 Moro-inozit 1,000,0 CaCh törzsoldat: mg/100 ml CaCh • 2Hi0 15.000,0 50 BA(benzioladenin) törzsoldat: mg/100 ml BA 100,0 55 CA-pantolenát törzsoldat: mg/100 ml CA-pantotenát 100,0 60 A következő mikroelemeket 150 ml bidesztil-Iáit vízben oldjuk fel: 9 mg/100 ml NÎUNO3 1600 65 KNOj 1000 MgSÜ« • 7ihO .370 KIIjPOi 170 A tőrzsoldatok következő záudjuk ehhez: mennyiségeit hoz Mikroelem törzsoldat 1 ml CaCb Z/J mí KJ 1,1 ml Fej-Naj EDTA 10,0 ml Vitamin „ 10,0 ml Ca-Pantotenét törzsoldat 2 ml/ 1 BA 0,5 ml/1 GA3 0,5 ml/ 1 Az így elkészített módosított t.ápoidatbun 30 g szaharózt feloldunk, majd az oidutol. 100 ml-re feltöltjük. Az oldat pH-jét 5,8-fa állítjuk be, 0,1 n Í1CI vagy 1 n NaOH szil k «ég sze r in t i hozzáadásával. 10 g agar-ugarl (Difco) 100 iíiI vízben melegítéssel feloldunk. Az agar-agar teljes feloldódása után ezt az előzőleg ekészített tápoldathoz adjuk és bidesztillált víz hozzáadásával 1000 cm3 térfogatra egészítjük ki. Keveréssel biztosítjuk aí oldat tökéletes homogenitását. Az összekeverés után a táptalajból y cm magas 25 mra átmérőjű steril fiolákba 10 ml-L öntve dozlrozzuk. A táptalfijos fiolákat alufólia sapkával zárjuk. A táptalajt tartalmazó fiolákat autokláv», bnn 120 °C-on 1,5—1,B nt.m nyomáson 15-20 percig sterilizáljuk. Az auloklávozást követően a fiolákat szobahőmérsékleten tartjuk a táptalaj teljes megszilárdulásáig, illetve a felhasználásig. A táptalajra izolált ineriszléinákat tartalmazó fiolákat 20-25 °C-us hőmérsékletű, 1500-200 lux erősségű megvilágítású tenyésztő-szobába helyezzük el. A fényperiódus időtartama 16 óra, a sötét periódus hossza 8 óra naponként. Az ízolátumot mindaddig ilyen körülmények közöLt tartjk, míg a rnerísztéiuákból 4—íj leveles hajtások nem fejlődnek. Amennyiben ennek időtartama a 6 hetet meghaladja, abban az esetben a merisztémáknt A hét után' n fentebb leírt összetételű friss táptalajra puaszáljuk át. Szükség esetén 3—1 hetenként a passzálást meg kell ismételni. Ezt követi a merisztéma eredetű növények mikroszaporítáau. A mikroszuporíláshoz használható táptalajt ugyanúgy készítjük oí, ahogy az a merisztéma izoláláshoz alkalmazott táptuluj elkészítésénél leírásra került.. A különbség csupán az, hogy a növényi hormonokból (UA és GAa) annyit adagolunk a táptalajba, hegy '1
