192837. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírusszegény vetőburgonya nagyüzemi előállítására
annak végleges koncentrációja az alább megadott értékű legyen: BA (benziladenin) 0,5 mg/l GAi(gibberellin) 0,2 mg/l A táptalaj autoklávozása, dozírozása az előzőekben leírtak szerint történik. A továbbiakban mikroszaporítást végzünk, melynek menete az alábbi; A merisztóma izolátumokból fejlődött 4-8 leveles hajtásokat steril eszközökkel, lamináris box alatt (aszeptikus körülmények biztosításával) leválasztjuk, kiemeljük a fiolából és steril Petri-csészábe tesszük. Ugyancsak steril bontó-lándzsával a hajtásokat feldaraboljuk, ú.n. nodális szegmenteket készítünk belőlük. A hajtások feldarabolását úgy végezzük, hogy a hajtást mindegyik levélemelet fölött és alatt - a levélemelet feletti szárrész rővidebb, az alatta levő hosszabb legyen - a hajtástengelyre merőleges irányban elmetszük. Az így kapott hajtásszegmenten levő levelecskét eltávolítani nem szabad. A leírtak szerint a teljes hajtástengelyt feldaraboljuk. A Bzegment-darabokat egyesével vagy többesével a mikroszaporitáshoz készített táptalajt tartalmazó fiolába helyezzük. A hajtásszegmenteket úgy helyezzük a táptalajba, hogy a levélke alatti bazális hajtásrész a levél eredésének szintjéig a táptalajba kerüljön. Az izolátum behelyezése után a fiolát alufólia sapkával fedjük le. A hajtások leválasztásának, feldarabolásának természetszerűleg aszeptikus körülmények között (lamináris box, steril fülke, stb.) kell megtörténni, gondosan vigyázni kell a sterilitás követelményének betartására. Az izolált hajtásszegmenteket tartalmazó fiolákat 20-25 °C-on, minimum 2000 lux erősségű fényen 16/8 óra világos/sötét periódus biztosításával tenyésztő-szobában tartjuk. Az izolátumokat ilyen körülmények között tenyésztjük mindaddig, amíg levélhónalji rügyből 8-10 cm hosszú, 6-8 leveles hajtás nem képződik. Az ilyen fejlettségű hajtásokat az előzőekben leírt módszer szerint ismét feldaraboljuk és nodális szegment izolátumokat készítünk belőlük. A folyamatot mindaddig ismételjük - nodális szegment-növénykenodális szegment-növényke - amíg a kellő mennyiségű növényszámot elérjük. A nodális szegment tenyészetekkel előállított, az in vitro fázisban hajtást és gyökeret képzett növényeket 14-21 napig szabályozott környezeti feltételek között kell tartani, (ezt nevezzük intermedier fázisnak). Az intermedier fázisban felhasznált anyagök és eszközök: a) szigetelt és zsilippel ellátott üvegházi fülke, melyben elhelyezésre kerülnek: 7 1- automata szabályozóval ellátott párologtató berendezés- mikroklíma létesítésére alkalmas berendezés- szabályozószeleppel ellátott fűtőtestek (radiátorok) b) szaporítóaszlal c) szaporító pohár d) őrült perlit e) kerti föld f) mancozeb és bonomyl hatóanyagú fungicid. A kereskedelmi forgalomban vásárolható kerti földet az alján perforált szaporító pohárba töltjük, majd 0,16% mancozeb s 0,05% benomyl hatóanyagot tartalmazó oldattal leöntözzük, a talajt az ültetésig nedvesen tartjuk. A fiolákból kiemelt növények gyökereiről a táptalajt csapvizzel lemossuk, majd a növényeket a szaporító pohárban előkészített földbe ültetjük oly módon, hogy legfeljebb 3-4 lomblevél kerüljön a talaj felszíne fölé. Az elültetett növényeket pl. Hoagland-féle tápoldattal beöntözzük. A növényeket a szaporító pohárral együtt az asztalokon levő megnedvesített perlitbe ágyazzuk. A növények az intermedier fázisban különösen érzékenyen reagálnak a környezeti feltételek változására, ezért állandó hőmérsékletet, páratartalmat és megvilágítási időt kell számukra biztosítani, melyek értékei a következők: hőmérséklet: 22/17 °C, 16/8 napi periódussal megvilágítás: 15 000 lux, 16 órás folyamatos megvilágítás relatív páratartalom a növények számára 4-5 napig 95-100%. A továbbiakban folyamatosan, a kiültetésig 60%-ra csökkenő értéket kell biztosítani. A növények talaját és a perlitet folyamatosan nedves állapotban kell tartani az intermedier fázisban. A növényeket 8 napon keresztül kétnaponként pl. Hoagland oldattal be kell öntözni. A növényeknek a kiültetés időszakára a 8-10 lombleveles állapotot kell elérniük. Az intermedier szakaszt követően a növényeket megfelelő minőségű, vírusszegény szaporítóanyag nyerése céljából izolált körülmények között kell felnevelni. Erre a célra izolálorsátort használunk. A mintegy 7,5 m fesztávolságú vázat a sátor hossztengelyével párhuzamosan kiképzett, beton alapra felszereljük. Az izolátor8Ótor elején legalább 3,0 hosszúságú zsiliprészt kell kialakítani, melyet egyik oldalon a szabadba, a másik oldalon a burgonya állományra nyíló ajtó határol. A zsiliprész aljzatát a tisztíthatóság érdekében cementlappal, vagy betonnal kell borítani. 8 92837 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
