192837. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírusszegény vetőburgonya nagyüzemi előállítására
3 üoi.rr 1 A találmány eljárás vírusszegény vetőburgonya nagyüzemi előállítására, melynek során a szaporítóanyagot növényi hajtáskúpokból állítják elő sojttenyászettel. Ismeretes, hogy a burgonya a vírusfertőzésre érzékenyen, terméscsökkenéssel reagál. A hagyományos szabadföldi módszerrel a környezet fertôzôttBége, valamint a vírusvektort képező levéltetvek nagy száma miatt nem akadályozható meg a szaporítótábiák vírusos leromlása. Ismeretes, hogy a növényi hajtéslenyészkúpok irányába - vírusfertőzött növények osetébon is - erőteljesen csökken a víruskoncentráció. Magukban a merisztematikus sejtekben, illetve szövetekben vírus nem mutatható ki. A szövettenyéaztési módszerek rohamos fejlődése lehetővé tette a növény e szövetének izolálásával, majd ennek in vitré tenyésztésével teljes, vírusmentes növény előállítását. A találmány célul tűzte ki olyan szaporítási ciklus és rendszer kidolgozását, mely a szövettenyésztési módszerre alapozva lehetővé teszi vírusmentes vagy vírusszegény burgonyavető-gumó nagyüzemi előállítását. A találmány feladata - felhasználva a meriBztéma tenyésztés eredményeit, azok továbbfejlesztésével nagyüzemi burgonyatermesztési technológiára alapozva -, módot adjon vírusmentes vagy vírusszegény burgonya-vetőgumó üzemi méretű előállításéra és a vírusmentes fajtafenntartásra. A találmány tehát eljárás vírusszegény vetőburgonya nagyüzemi előállítására, melynek során bioteszt és szerológiai vizsgálat alapján vírusmentes vagy vírusszegény, a fajtára jellemző jeggyel bíró gumókat kiszelektálunk, majd a gumókon szobahőmérséklet mellett, megvilágítás nélkül, internodiumos hajtásokat nevelünk. A mintegy 3-6 rügykozdoményos hajtásokat a gumókról leválasztjuk, az egyes csúcshajtáskezdeményt és hajtáskezdeményt merisztéma izolálására használjuk oly módon, hogy a merisztémaszövetot táptalajt tartalmazó tenyészedénybe, pl. fiolába helyezzük. A táptalajt az előkészítés során mintegy 120 °C-on és 1,5-1,8 bar nyomáson sterilizáljuk. A táptalajra izolált merisztémát tartalmazó tenyészedényeket, pl. fiolákat, mintegy 20-25 °C-on, 1500-2000 lux megvilágítású, periodikusan elsötétíthető szobába helyezzük és mindaddig ott tartjuk, míg a merÍBztémán 4-6 leveles hajtások nem fejlődnek. Ezt követően a merisztéma eredetű növényeket célszerűen Petri-csészében nodális szegmentekre feldaraboljuk és növényi hormonokat tartalmazó, szaporításra készített táptalajon tenyésztőszobában, előnyösen 16/8 órás megvilágítási/sötétílési periódusokban 6-8 leveles hajtásokat nevelünk. Azokat ismét feldaraboljuk és a feldarabolással újabb nodális szegment-izolátumokat képezünk. A folyamától mindaddig ismételjük, míg kellő nO- vényszámot elértük, majd az in vitro fázisban hajtást és gyökereket képzett, növényeket 14-21 napig szigetelt, mikroklíma képzősére alkalmas körülmények közölt, intermedier fázisban szaporltópohárban levő kerülőidbe helyezzük. Ezt kővetően 8-10 loinblcveles állapotban izolátorsátor alatt előkészített talajban, - melyei mikro- és makroolemekkel kiegészített műtrágyákkal feldúsítottunk, - a szaporl tópoharakból a növényeket föld labdával áttelepítjük. A továbbiakban a növények fejlődésével arányosan - folyamatos - fcltöltósl végzünk mindaddig, míg szaporításra alkalmas gumókat kifejlesztünk. Az előnyös fogunatosíLás szerint az in vitro származású növényekből nyert .<..siókul két ciklusban, izolálorsátorhózbun, vírusvektorok találkozását kizáró sávokban lovábbszaporitjuk és az állomány virológiailag ellenőrizzük, majd a vetőmóretű gumók kifejlődésekor deszikálást végzünk és a vetőgumókiit betakarítjuk, vetésig tároljuk. A továbbiakban a találmány szerinti eljárás foganatosílási módját részletesen is ismertetjük, anélkül azonbun, hogy oltalmi körünket a kiviteli példára korlátoznánk. Az eljárás szerint voktormentes körűimén jek között felnevelt, vizuális, bioleszl és szerológiui (ELISA) vizsgálat alapján vírusmentesnek bizonyult, a fajtára jellemző tulajdonságoknak legjobban megfelelő növények gumóit Hindilievel kezeljük, ami a csirázáei esélyt serkenti. A kezelt gumókat szobahőmérsékleten, megvilágítás nélkül 80-90% relativ páratartaőm mellett tartjuk, mig a gumókon 6-10 cm nagyságú, hosszú irilernudiumoB pincehajtások fejlődnek, melyeken legalább 3-6 rügykezdemény figyelhető meg. Az ilyen állapotú hajtásokat a gumókról leválasztjuk, folyó csapvízben 2-5 percig alaposan mossuk. A mosás után aszeptikus üvegedénybe töltött 70%-os etilalkoholba tesszük a hajtásokat és állandó rázogalás mellett 1-1 1/2 percig abban tartjuk. Az etilalkoholos kezelést követően, az alkoholt leöntjük, és 0,1%-os HgCl oldatot töltünk az üvegedényben maradt merisztémákra. A hujtások nagyságától és fejlettségétől függően a HgCl-on kezelést - áilundó rázogatás mellett - 1-2 percig alkalmazzuk. Ezt követően a sterilizáló oldatot leöntjük és a hajtásokat háromszor steril desztillált vízzel leöblítjük. Mindenegyes öblítés alkalmával, állandó rázogutris mellett, 2-3 percig tartjuk a steril desztillál! vizel a hajtásokon. A hajtások felületi sterilizálását a 70%-os etilalkoholos kezelés megkezdésétől aszeptikus körülmények közölt lamináris boxban kell végezni. A továbbiakban 9 merísztémák izolálásul végezzük el. A felülel-storilizáll hajtásokul steril edényben tartjuk lamináris box alatt az izolálás megkezdéséig. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
