192579. lajstromszámú szabadalom • Eljárás orálisan adagolható immunogén kompozíció előállítására
1 192 57S 2 " állítandó tápanyagban megkívánt oociszta száma alapján állítjuk be. A találmány szempontjából egyedül a kompozícióban jelenlevő élő betokozódott oociszták száma lényeges, az alkalmazásra kerülő végső tápanyag összetétele és fizikai formája lényegtelen. A kereskedelemben kapható komplett vagy tápérték szempontjából kiegyensúlyozott tápanyag használható, és a tápanyag tartalmazhatja a szokásos összetevőket, azaz proteint, szénhidrátot és zsírokat. A standard összetevők természete, úgymint a különböző hallisztek, gabonaőrlemények és más növényi anyagok, valamint ásványi adalékanyagok és a tápérték egyéb minőségi követelményei, úgymint a vitaminok, aminosavak és nyomelemek minimális szintje a technika területén jártas szakember számára ismertek. Abban az esetben, ha kémiailag ülepíthető rendszerként egy alginát alapú gélt használunk, a találmány szerinti készítmény úgy készíthető el, hogy kokcidia oocisztákat szuszpendálunk az alginát vizes oldatában, és az alginátot gélesítjük valamilyen alkalmas kémiai reakció útján. A gélesítést például egy „buborékképződési” rendszerben végezhetjük, ahol egy gélblokk képződik, amelyet azután később az alkalmazásnak megfelelő apróbb részekre darabolunk. A darabolás történhet például vagdalás, szeletelés vagy tördelés útján. Előnyösebb azonban, ha a gélesítést úgy végezzük, hogy viszonylag finom eloszlású termék képződjön, így az utólagos darabolás feleslegessé válik. Eljárhatunk például úgy, hogy az ülepedő gélt egy szűk sajtolónyíláson keresztül extrudáljuk, így tésztaszálszerű, viszonylag kis keresztmetszetű terméket kapunk. Úgy is eljárhatunk, hogy a szuszpenziót egy ülepítő közegbe extrudáljuk. A találmány szerint előnyösen úgy járunk el, hogy oociszta tartalmú vizes alginátoldat cseppeket ülepítő közeggel hozunk érintkezésbe. A cseppeket permetezés vagy előnyösebben valamilyen szórófejből történő csepegtetés útján hozzuk létre. Legelőnyösebben úgy járunk el, hogy gélgyöngyöket állítunk elő, oly módon, hogy az oocisztát tartalmazó alginát-oldat cseppjeit az ülepítő közegbe csepegtetjük. Ilyen körülmények között a cseppek nagyon gyorsan gélesednek, és különálló gyöngyök képződnek. Ülepedés után az alginátgyöngyöcskék az ülepítő közegből kinyerhetők. Kívánt esetben a gyöngyök méret szerint elkülöníthetők ismert módszerrel, például szitálással. Az oocisztát tartalmazó alginátgyöngyök előnyös mérete nedves állapotban 5 mm, amely dehidrált állapotban 1-3 mm átmérőnek felel meg. A dehidratált gyöngyök végső mérete attól függ, hogy a gyöngyök nedves állapotban mennyi szilárd anyagot tartalmaznak. Az alginát mennyisége a vizes oldatban elégséges kell legyen ahhoz, hogy az oldat egyenletes eloszlását biztosítsuk az ülepítő közegben. Ha például az ülepítő fürdőbe csepegtetjük az oldatot, a cseppeknek azonnal meg kell dermedniük ahhoz, hogy különálló gyöngyök képződjenek. Abban az cselben, ha jelentős mennyiségű töltőanyagot és egyéb komponenst keverünk a termékbe, előnyösen viszonylag magas molekulasúlyú alginátot használunk, ez kis koncentrációnál is szilárd gélt eredményez. Az alginát mennyisége a gél hordozóban nedves állapotban általában 0,25 és 10 tömeg% között van. A kereskedelemben kapható bármilyen alginát használható, előnyösen olyan alginátot használunk, amelyben a mannuronsav és guluronsav maradékok aránya magas. Mivel a találmány szerinti eljárással előállított vakcinákat állatok orális vakcinálására szánjuk, nem szükséges gyógyszerészeti vagy humán étkezési tisztasági fokozatú alginátot használni, bár ilyen anyagok is használhatók, amennyiben alkalmazásuk nem gazdaságtalan. Az algínáttal szembeni elsődleges követelmény az, hogy az abbin jelenlevő oldhatatlan anyagok ne gátolják a termékképződést, például azáltal, hogy az alginát folyási tulajdonságait lerontják vagy csökkentik a gél szilárdságát. Viszonylag kevéssé tisztított alginát használható. Az alginát kémiai ülepedése fémionokkal, különösen k ilciumionnal érhető el, amelyek az alginátot oldhatatlanná teszik. Legelőnyösebb ülepítőszerek a sók, például kílcium-klorid vagy kálcium-foszfát. Savak ugyanúgy alkümasak ülepítőszerként. Szabad savak, például sósav vagy ecetsav használható. Kémiailag ülepíthető rendszerek mellett hőhatásra kert ényedő rendszerek, például proteinek is használhatók. Amennyiben például zselatint használunk, vizes proteino datot készítünk, például 60 °C-on, az oldatot lehűtjük, é: a kokcidia oocisztákat hozzáadjuk az oldathoz olyan hőmérsékleten, ahol azok még életképesek maradnak. A zselatin gélesedése körülbelül 30 °C-on kezdődik, és ez meggyorsítható, ha a zselatinoldatot hideg olajba csepegtetjük. Az ülepítőszer koncentrációja az ülepítő fürdőben befolyásolja az alginátoldat ülepedési idejét. Emellett az ülepítőszer, különösen egy kálciumsó, például kálc um-klorid koncentrációja magas, akkor az alginátgyöngyökben is magas lesz a sókoncentráció. A gyöngyök így túlságosan megszilárdulnak, és nem lehet azokat dehidratalni. Emellett a nedves gyöngyökben a magas kálciumsó koncentráció erős ozmózis hatást gyakorol az oocisztára, anit lehetőség szerint el kell kerülni. Az ülepítő fürdőben a kálcium-klorid koncentráció általában legfeljebb 5 tömeg%. Ha azonban a megszilárdult gyöngyöket néhány óra hosszat, például éjszakán át vízben ázni hagyjuk, a kálc um-klorid fölöslege kidiffundál a gyöngyökből. Kívánt esetben a gélgyöngyök dehidratálását még levegővel történő szárítással végezhetjük. A végtermékben a nedvességtartalmat előnyösen 20 tömeg%-ra állítjuk be. Előnyös azonban, ha a gélgyöngyöket nedves állapotban tároljuk, például vizes közeggel érintkezésben tartva, mivel ez biztosítja a legelőnyösebb környezetet az oociszt ik számára. A gyöngyöket nedves állapotban keverhetjiik bele valamilyen tápba, és hagyjuk, hogy elérjen egy egyensúlyi nedvességszintet. A találmány szerinti eljárást a következő példákkal s:emléltetjük. 1. Példa Alapgélként a kereskedelemben kapható nátriumalginátot (Manucol LB, Kelco/AIL International Ltd. gyártmánya) használunk, 95 ml 11 tömeg% Manucol LB vizes oldatot összekeverünk 5 ml élő betokozódott kokcidia oocisztát (Eimeria tonella) tartalmazó vizes szuszpenzióval, amely körülbelül 600 000 oocisztát tartalmaz. Ezt az elegyet kb. 7,5 cm távolságból 5 tömeg%-os kálcium-klorid-dihidrát vizes oldatba csepegtetjük. A leülepedő gélgyöngyök átmérője kb. 5 mm, súlya kb. 40 mg. 2 perc alatt kb. 2500 gyöngyöt kapunk. A gyöngyöket 15 percig az ülepítő fürdőben hagyjuk, majd leszűrjük, majd éjszakán át csapvíz5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
