192567. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új benzamidin-származékok előállítására
1 192 567 2. Táblázat 2 A találmány szerinti vegyületek baktérium ellenes hatását különböző törzseken, az alábbiak szerint határoztuk meg. A vizsgálandó vegyület különböző hígításait baktérium-inokulummal hozzuk érintkezésbe. Az érintkezési periódus végén a baktérium szuszpenzió és a vegyület keverékéből egy alikvot részt olyan agar-agar táptalajra viszünk, amely a vegyület baktérium ellenes hatását közömbösítő szert tartalmaz: Meghatározzuk azt a minimális — jug/ml-ben kifejezett — baktericid koncentrációt, amelynél nagyobb koncentrációk esetén a baktériumok nem növekednek. A vizsgálat során az alábbi baktérium törzseket használjuk: 1 — Escherichia coli CNCM 54125, 2 — Klebsiella pneumoniae R030, (kapszuláris) 3 — Pseudomonas aeruginosa CNCM A22, 4 - Streptococcus faecalis CNCM 5855, 5 — Staphylococcus aureus CNCM 53154 A 2-es sorszámú törzset Wogel Fergusson táptalajon, a többieket pedig tripszines szója agar Difco (TSA) táptalajon tartjuk. A W ogel F ergusson táptalaj összetétele Nátrium-klorid 2 g Kálium-szulfát 1 g Magnézium-szulfát 0,25 g Szacharóz 20 g Élesztőkivonat 2 g Agár 15 g Desztillált vízzel 1 literre kiegészítve, 120 °C-on 15 percig sterilizálva. A telepeket 37 °C-on 24 óra hosszat tenyésztjük, majd üveggyöngyökkel és 1000 ml desztillált vízben 1 g triptont, valamint 8,5 g nátrium-kloridot tartalmazó oldat 10 ml-nyi oldatával összegyűjtjük. A kapott szuszpenziót keverjük, és a fény-transzmiszszló intenzitását (%-ban kifejezve) 620 nm hullámhosszon spektrofotometriásán mérjük. Eredményeinket az alábbiakban foglaljuk össze: 1. sz. törzs: 70 % 2. sz. törzs: 80 % 3. sz. törzs: 70 % 4. sz. törzs: 60 % 5. sz. törzs: 60 % A baktérium-inokulum olyan szuszpenziónak felei meg, amelynek koncentrációja 1/20-a ezen baktérium szuszpenziónak. Üregeket tartalmazó lemezekre a vizsgált anyag különböző hígításait helyezzük. A vizsgált vegyület különböző hígításaival több helyű inokulátort használva különböző baktérium szuszpenziókat kezelünk. 20 perces érintkezési időszak után Petri-csészébe helyezett olyan agar-agar (TSA) táptalajra, mely a vegyület hatását közömbösítő szert m 1000 ml TSA-ban (Difco) 20 g lubrol W-t, 2,5 g Tween 80-t és 2,5 g nátrium-tioszulfátot — tartalmaz, az inokulátorral alikvot részeket viszünk. A közömbösílő szer hatékonyságát minden vizsgált vegyület esetén olyan módon ellenőrizzük, hogy a vizsgált vegyület hígításának alikvot részét a táptalajra helyezzük. Szárítás után a megfelelő inokulumot ugyanarra a helyre visszük. Agar-agar táptalajon közömbösítő szerrel és anélkül inokulum-kontrollt készítünk. Az eredményeket — melyeket a 2. táblázatban foglaltunk Össze — 37 °C-on végzett 48 órás inkubáció után határozzuk meg. A minimális baktericid koncentráció értékeket (MBC) jum/ml-ben fejezzük ki A vegyület jele Baktérium törzs 1 2 3 4 5 SR 41613 A 10000 10000 15000 10000 5000 SR 41946 A 4000 5000 4000 2000 2000 SR 42748 A 10000 10000 <5000 20000 10000 SR 41149 A 5000 6000 6000 20000 20000 CM 40721 A 8000 8000 8000 8000 8000 CM 40847 A 5000 5000 5000 5000 5000 3R41616 A 7500 5000 5000 15000 15000 CM 40940 A 16000 15000 15000 20000 15000 SR 41579 A 8000 8000 8000 10000 15000 A fenti eredmények azt szemléltetik, hogy a találmány szerinti vegyületek hatása a vizsgált baktérium törzsek mindegyikére hasonló szintű. A találmány szerinti vegyületek hatásának átlagos szintje a baktericid hatású fenil-etil-aikohollal összehasonlítva - melyet mind antiszeptikus, mind pedig tartósító szerként használnak — magasabb. Továbbá e vegyületek vízben oldódnak, s így alkalmazásuk — különösen galénikus készítmények esetén - egyszerűbb. A találmány szerinti vegyületek toleranciáját tengeri malacokon tanulmányoztuk:. Az állatok szőrzetét a hát középvonalának valamelyik oldalán leborotváljuk és ezt minden két napban megismételjük. A találmány szerinti vegyület vizes vagy alkoholos oldatának 0,2 ml-nyi meny - nyiségével a leborotvált területen hatos csoportokat kezelünk. Amennyiben alkoholos oldatokat alkalmazunk, az állatok kontroll csoportját az egyik oldalon alkohollal kezeljük. A bőr tolerancia előzetes vizsgálata céljából 3 hétig hetente 6 napon át, a 7. nap kivételével, naponta egyszer végzünk kezelést. Megállapítjuk eritéma, bőr-errupció vagy hiperkeratózis jelenlétét és ezek rögzített skála szerinti intenzitását. A bőr érzékenységi tesztet 2 hetes szünet után ugyanazokon az állatokon végezzük. A kezelés 1 hétig tart, az előzővel megegyező módon. A helyi toleranciavizsgálatánál ismertetett szempontok és skála szerint értékelünk. Tengeri malacokon továbbá vizsgálatot végeztünk a találmány szerinti vegyületek fototoxikus és fotoallergiás hatásának meghatározása céljából. A vizsgálati módszert az irodalom ismerteti (J. Unkovic, G. Mazue, J. Girard: Sciences et Techniques de l’Animal de laboratoire, Vol. 8 (3), 149 — 160 (1983), mely L. C. Harber és munkatársai (Arch. Dermatol., 1967, Vol. 96, 646-656) és L. J. Vinson és munkatársai (J. Soc. Cosm. Chem., 1966, Vol. 17, 123-130) által leírt módszer alkalmazása.) A vizsgált vegyületek egyikénél sem mutatkozik tengeri malacokon gyengének a tolerancia, velük szembeni érzékenység, és fototoxikus vagy fotoallergiás hatás sem mutatható ki. A jó mikróbaellenes hatású és jól tolerálható találmány szerinti vegyületeket számos módon humán célokra kozmetikában és gyógyászatban, valamint állatgyógyászati célokra vagy élelmiszernövények terüle-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
