192461. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a BBM-2478 antibiotikum komplexnek és komponenseinek a BBM-2478A és BBM-2478B antibiotikumoknak, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítményeknek az előállítására
1 Ü92 461 2 10 napig végezzük. Optimális termelést általában 6—7 nap alatt érünk el. Viszonylag kis mennyiségű antibiotikum előállítására rázólombikokat és felületi tenyészetet alkalmazhatunk, nagyobb mennyiségű termék előállításához azonban steril tartályokban elhelyezett, merített aerob tenyészet előnyös. Ha a fermentálást tartályban kívánjuk kivitelezni, célszerűen vegetatív oltóanyagot készítünk tápanyagokat tartalmazó húslevesben, amelyet beoltunk az organizmus szuszpenziójával, és amikor rendelkezésünkre áll a fiatal, aktív, vegetatív oltóanyag, aszeptikus körülmények között átvisszük azt a fermentáló tartályban levő táptalajba. Tartályokban és palackokban a levegőztetést úgy oldhatjuk meg, hogy steril levegőt vezetünk át a fermentáló táptalajon vagy vezetünk annak felületére. További keverést mechanikai keverő segítségével biztosíthatunk. Kívánt esetben habzásgátió anyagokat, például lárdolajat is adhatunk a táptalaj.hoz. A BBM—2478 jelű antibiotikum képződését a fermentációs közegben egyszerűen követhetjük a fermentálás folyamán a papírkorongos agar-agar diffúziós vizsgálattal, amelynél organizmusként Micrococcus luteus PCI 1001 törzset alkalmazunk. A BBM—2478 jelű antibiotikumok elkülönítése Miután a táptalaj optimális antibiotikum-tartalmát elértük, önmagában ismert módon, például szűréssel vagy centrifugálással elválasztjuk a micéliumot és az oldhatatlan maradékokat a fermentációs táptalajtól. A mioéliumtartalmú szűrőpogácsában levő antibiotikumot úgy nyerhetjük ki, hogy a szűrőpogácsát metanollal extraháljuk, az oldhatatlan anyagokat szűrjük, és a metanolos extráktumot vizes oldat visszamaradásáig pároljuk be. A micélium szűrése vagy centrifugálása utáni szűrletből az antibiotikumot n-butanollal extraháljuk, majd a butanolos extráktumot vizes oldat visszamaradásáig töményítjük. A BBM—2478A és B jelű antibiotikumokat tartalmazó vizes metanolos és butanolos extraktumokat ezután önmagában ismert kromatográfiás tisztításnak vethetjük alá, és ilyen módon tisztított BBM—2478A és B antibiotikumhoz jutunk. Egy előnyös tisztítási módszert ismertetünk a 2. példában. A BBM—2478 jelű antibiotikumok fizikai-kémiai tulajdonságai A BBM—2478A és B jelű vegyületeket sárgásnarancs színű kristályos anyagok alakjában különítettük el. A BBM—2478 mindkét komponense eltér a sartrözintől a vékony-rétegkomatográfiás vizsgálat alapján, amint azt az 5. táblázat mutatja. A BBM—2478A jelű vegyület jól oldódik, dimetilszulfoxidban, dimetilformamidhan, dioxánban és savas vízben, rosszul oldódik metanolban, etanolban és kloroformban, s oldhatatlan más szerves oldószerekben. A BBM— 2478B jelű vegyület oldhatósága hasonló a BBM—2478A jelű vegyületéhez, azzal az eltéréssel, hogy a BBM—2478B jelű vegyület nem oldódik savas vízben. A B!BM—2478A és B vegyület pozitív reakciót ad vas(III)-klorid és antron reagenssel. A BBM—2478A jelű vegyület pozitív reakciót ad ninhidrinnel, míg a BBM—2478B jelű vegyület viselkedése negatív ugyanennél a vizsgálatnál. A Tollen- és Sakaguchi-reakoiók mindkét vegyület esetén negatív eredményt szolgáltatnak, A BBM—2478A és B jelű vegyületek fizikai-kémiai tulajdonságait a 6. táblázatban foglaljuk össze. A két vegyület ultraibolya spektruma hasonló, maximumok jelentkeznek 236, 266, 398 és 422 jum értéknél semleges és savas oldatban. Alkalikus oldatban 240, 268 és 435 /önnél találhatók a maximumok. Ezek a spektrumok szoros kapcsolatban vannak a sartrözin spektrumával. A BBM—2478A és B vegyület infravörös spektruma az 1., illetve a 2. ábrán látható. A BBM—2478A jelű vegyület PMR spektrumát a 3. ábra, 13C—NMR spektrumát pedig a 4. ábra mutatja be. 5. táblázat A BBM—2478A és B jelű vegyület, valamint a sartrözin vékony-rétegkomatográfiás jellemzői SÍO2 SÍO2 CHCI3— EtOAc— MeOH MeOH _____________________________(7:3) (1:1) BBM—2478A Rf 0,37 R, 0,16 BBM—2478B 0,78 0,57 Sartrözin 0,65 0,48 6. táblázat A BBM—2478A és B jelű vegyület fizikai-kémiai tulajdonságai BBM— BBM— 2478A 2478B Megjelenés sárga, sárga, amorf por amorf por Olvadáspont 225— 271— Md (c = 0,5; piridin) —226 °C —272 °C (bomlik) +124° —8° UV1«£H nm (E}%m ) 236 (590) 236 (740) 266 (550) 266 (700) 333 (100) 333 (118) 378 (132) 378 (169) 398 (205) 398 (255) 422 (225) 422 (290) Analízis talált: C 59,28% H 5,40% N 2,06% C 63,07% H 4,51% 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6fl 65 7
