192461. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a BBM-2478 antibiotikum komplexnek és komponenseinek a BBM-2478A és BBM-2478B antibiotikumoknak, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítményeknek az előállítására
1 192 461 2 BBM— BBM— 2478A 2478B számított: C33H35NO13H2O C26H22O10 képletre C 59,01% C 63,16% H 5,55% H 4,48% N 2,09% A BBM—2478A jelű vegyület magmágneses rezonanciaspektruma 33 szénatom jelenlétét mutatta, mégpedig a következőkét: négy C— —CH3, egy —OCH3, kilenc >CH—, egy >C<, ö,t —CH= és 13 >C—. Ezekből a spektrumadatokból és a BBM—2478A jelzésű vegyület mikroanalitikai adataiból arra következtettünk, hogy a vegyület képlete C33H35NOX3. A vegyületet 0,4 n metanolos sósavoldattal visszafolyató hűtő alatt forralva 1 órán át hidrolizáltuk. A kivált sárga kristályokat szűrtük, és a szűrletet vákuumban betöményítettük. A kapott szirupszerű folyadék ninhidrinnel pozitív reakciót adó cukortöredékeket tartalmazott. A kristályos anyagot színképelemzés alapján azonosítottuk, hiteles mintával összehasonlítva, s az csartarinnak bizonyult, amely a sartrözin aglikonja, s az {V) képlettel jellemezhető. A vizes koncentrátumban jelenlevő cukortöredék az (I) általános képletű anomer diszacharidkeverék volt, amelyet kromatográfiás úton választottunk szét Amberlite CG—50 (NH4+ alakban levő) ioncserélő gyanta alkalmazásával, így közel azonos mennyiségben kaptuk az Rí helyén metoxicsoportot, R2 helyén hidrogénatomot tartalmazó (I) általános képletű alfa-metil-glikozidot és az Rx helyén hidrogénatomot, R2 helyén metoxicsoportot tartalmazó (I) általános képletű béta-metil-glikozidot. Mindkét vegyület összegképlete C15H29NO8 volt a tömegspektrum (M+ + 1: m/z 352) és magmágneses rezonanciaspektrum alapján. A két vegyület fizikai-kémiai tulajdonságait a 7. táblázatban foglaljuk össze. Az Rí helyén metoxicsoportot, R2 helyén hidrogénatomot tartalmazó <I) általános képletű vegyület, amelyet a továbbiakban (la) általános képletű vegyületnek nevezünk, valamint az Rí helyén hidrogénatomot és R2 helyén metoxicsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyület, amelyet a továbbiakban (Ib) általános képletű vegyületnek nevezünk, ellenállt a további savas hidrolízisnek, és a képződő cukortöredékek jelentős mértékben elbomlottak, ha a savasság elegendő volt a glikozidkötés elhasításához. Az (la) és (Ib) képletű vegyület keverékének 370 mg mennyiségét metanolban acetileztük, majd a kapott mono-N-acetil-származékot (460 mg, M+ + 1: m/z 394) 4,5 n metanolos sósavval hidrolizáltuk. A terméket szilikagélt tartalmazó oszlopon kromatografáltuk, alsó fázisként kloroform, metanol és tömény ammóniumhidroxid 6:1:1 arányú elegy ét használva. Így a következő termékeket kaptuk: egy N-acetií-amino-cukor alfa- és béta-anomerje [140 mg acilezett (Ha) képletű vegyület, amely az Rí helyén metoxicsoportot, R2 helyén hidrogénatomot tartalmazó (II) általános képletű vegyület, és 22 mg acilezett (Ilb) képletű vegyület, amely az Rí helyén hidrogénatomot, R2 helyén metoxicsoportot tartalmazó (II) általános képletű vegyület], valamint egy semleges cukor alfa- és béta-anomerje [85 mg (Illa) képletű vegyület, amely az Rx helyén metoxicsoportot, R2 helyén hidrogénatomot tartalmazó (III) általános képletű vegyület és 79 mg (Illb) képletű vegyület, amely az Rx helyén hidrogénatomot, R2 helyén metoxicsoportot tartalmazó (III) általános képletű vegyület]. Amikor a nitrogénatomon acilezett (Ha) képletű vegyületet telített báriumhidroxid-oldattal kezeltük, az kvantitatíve dezacetileződött, és a szabad aminocsoportot tartalmazó (Ha) vegyületté alakult. A (Ha), (Illa) és (Illb) vegyületek fizikai-kémiai adatait a 8. táblázatban mutatjuk be. A magmágneses rezonanciaspektruma alapján a (Ha) képletű vegyület metil-2-amino-2,6-didezoxi-3-0-metil-alfa-D-galaktopiranozidnak bizonyult. Amint az a 8. táblázatból kitűnik, a (Ha) képletű vegyület MMR spektruma öt, gyűrűhöz kapcsolódó protont, továbbá két -OCH3 és egy C-CH3 jelet tartalmaz. A gyűrűhöz kapcsolódó protonok elsőrendű analízise a következő kapcsolási állandókat szolgáltatta: Jx_2 = 3,8; •I2-3 = 10,5; Ú3_4 = 3,0; J4-5 < 1,0 és J5-6 = = 6,4 Hz. Ezek az értékek megfelelnek a feltételezett szerkezetnek. Emellett a (Ha) képletű vegyület N,0-diacetil-származékának fizikai-kémiai adatai (olvadáspont: 163—164 °C és [a]” = — +154°, c = 0,3; kloroform) hasonlóak azokhoz az adatokhoz, amelyeket M. B. Perry adott meg a metil-2-acetamido-4-0-acetil-2,6-didezoxi-3-0-metil-alfa-D-galaktopiranozidra [Can. J. Chem., 52, 3251—3255 (1974)]. A (Illa) képletű vegyület protonmágneses rezonanciaspektruma a következő kapcsolási állandókat adta: Jx_2 = 4,5; J4_5 < 1,0 és J5-6 = 6,7 Hz, míg a (Illb) képletű vegyület hasonló adatai: Jx_2 == 7,8; J4_s 1,0 es Js_6 == 6,5 Hz. Mindkét vegyület spektrumából kitűnt a gyűrű 3-as helyzetű szénatomjához kapcsolódó proton hiánya. A színképadatok arra mutattak, hogy a (Illa), illetve (Illb) képletű vegyület a 6-dezoxi-3-C-metil-gulopiranozidnak (metil-virenozidnak) vagy a 6-dezoxi-3-C-metil-galaktopiranozidnak az alfa-, illetve béta-metil-glikozidja. A vékony-rétegkromatográfiás vizsgálat és a magmágneses rezonanciaspektrum azt mutatta, hogy a metil-béta-D-virenozid hiteles mintája különbözött a (Illb) képletű vegyülettől: a metil-virenozid Hx és H5 jelei lényegesen kisebb értékűek voltak, mint a (Illb) képletű vegyület hasonló jelei. Ez arra mutat, hogy a metil-virenozid 3-as helyzetű szénatomjához kapcsolódó hidroxilcsoport axiális irányítottságé, míg a (Illb) képletű vegyületé ekvatoriális irányítottságú. A (III) általános képletű vegyületnek D- konfigurációt tulajdonítottunk a (Illa) és (Illb) képletű vegyület optikai forgatóképessége alapján, valamint azért, mivel d[M]CuAm értéke a (Illa) képletű vegyületre —1309° volt. A (Illa), 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
