192456. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-lizin előállítására
1 192 456 2 élesztőhidrolizátum (fehérje—vitamin-koncentrátum) vagy kukoricalekvár 40,0 ammónium-szulfát 20,0 kh2po4 5,0 k2hpo4 5,0 CaC03 10,0 pH-értéke 7,0—^7,2 A fermentáláshoz a következő összetételű (g/1) tápközeget használjuk: 50%-os cukortartalmú melasz 250,0 (ami 12,5 + 0,5% redukálóanyagtartalomnak felel meg) Kukoricalekvár vagy élesztőhidrolizátum (fehérje—vitaminkoncén trátum) 40,0 ammónium-szulfát 25,0 kh2po4 5,0 szintetikus habzásgátló 0,5—1,0 pH-érték 7,0—7,2 A fermentációs közeget 0,1—8 tf% mennyiségben beoltjuk az inokulummal. A fermentáció 30—33 °C hőmérsékleten, 7,0—7,8-as pH-érték és a teljes telítettség 20%-át kitevő p02-érték mellett történik. A kultúra növekedése az oltás pillanatával kezdődik, a növekedés lag-fázisa kimarad. Addig fermentálunk, míg a közegben levő redukáló anyag koncentrációja 0,5% alá nem csökken. A fő fermentáció 48—55 óráig tart. A fermentáció végén a közegben 53 g/1 L-lízis dúsul fel (L-lizin-monohidrokloridra átszámítva). A cukorátalakítási tényező = 0,42, az L-lizinszintézis sebessége pedig 0,96 g/1 óránként. A közegben levő biomasszatartalom 15—20 g/1. Ezután a tenyészléből ismert módon izoláljuk a végterméket folyékony vagy száraz L-lizin-takarmánykoncentrátum vagy tiszta kristályos L-lizin formájában. A találmány szerinti eljárásnak a következő előnyei vannak az ismert eljárásokkal összehasonlítva : — a termelő növekedési sebessége az oltás pillanatától kezdve nő, mivel a növekedés lagfázisa kimarad; — az L-lizin-szintézis sebessége a kétszeresére nő, a szintézis a fermentációs folyamat beindulásával kezdődik; — a fermentációs ciklus 25%-kal lerövidül, ami a folyamat gyártási technológiáját egyszerűsíti és a készülékigényt csökkenti. A találmányt az alábbi példákkal közelebbről ismertetjük. 1. példa L-lizin-termelőként a Brevibacterium flavum RC—115 törzset használjuk. A hús-pepton-agarra frissen beoltott kultúrát 1 kRad/perc és 10 kRad összdózisú sugárzásnak vetjük alá. Ezután a ferdeagaras kultúrát inokulumként használjuk fel. Minden lombikba 10 ml steril csapvizet öntünk és rázzuk. A kapott szuszpenziót oltóanyagként alkalmazzuk, amit 2 ml (8%) mennyiségben adunk a fermentációs közeghez. A fermentációs közeg összetétele a következő (g per 1 1 csapvíz): 50%-os cukortartalmú melasz 250,0 (ami 12,5% redukálóanyag-tartalomnak felel meg) kukoricalekvár (50%-os szárazanyag-tartalommal) 40,0 (NH4)2S04 25,0 KH2P04 5,0 K2HP04 5,0 CaC03 10,0 A tápközeget 105 Pa túlnyomáson 40 percig sterilizáljuk. A táptalaj sterilizálása után a pH- értéket 25%-os ammónium-hidroy id-oldat hozzáadásával 7,0—7 2 szintre állítjuk, be. A tenyésztést 750 ml térfogatú lombikban, 25 ml tápközegben 230 fordulat/perc frekvenciájú rázóasztalon, 30—33 °C hőmérsékleten végezzük. A fermentálás 50 óráig tart, ez alatt az idő alatt a cukorkoncentráció 0,5%-ra csökken és 40,7 g/1 L-lizin termelődik (L-lizin-monohidrokloridra átszámítva), a cukorátalakítási tényező 0,33. Az L-lizin bioszintézis átlagos sebessége az egész fermentációs periódusban 0,81 g/1 óránként. 2. példa L-lizin termelőjeként a Brevibacterium flavum RC—115 törzset alkalmazzuk. A hús-pepton-agarra frissen oltott kultúrát 3 kRad/perc dóziserősségű 20 kRad összdózisú sugárzásnak vetjük alá. A tenyésztést az 1. példához hasonlóan végezzük. A 24 órás fermentálás alatt a cukorkoncentráció 0,5%-ra csökken és 43,4 g/1 L-lizin termelődik (L-lizin-monokloridra átszámítva). A cukorátalakítási tényező 0,35. Az L-lizin bioszintézis átlagos sebessége a teljes fermentációs folyamat alatt 0,90 g/1 óránként. 3. példa L-lizin-termelőként a Brevibacterium flavum RC—115 törzset alkalmazzuk. A frissen átoltott kultúrát 4 kRad/perc dóziserősségű és 30 kRad összdózisú sugárzásnak vetjük alá. A fermentáláshoz 750 ml-es lombikot használunk, amely a következő összetételű oltótápközeget tartalmaz 25 ml mennyiségben: 50%-os cukortartalmú melasz 200,0 (ami 10%-os redukálóanyagtartalomnak felel meg) kukoricalekvár (50%-os szárazanyag-tartalommal) 40,0 (NH4)2S04 20,0 kh..po4 5,0 k2hpo4 5,0 CaC03 10,0 20 órás növekedés után 165 ml (a tápközegtérfogat 1%-a) inokulumot steril körülmények között átjuttatunk egy 30 1 térfogatú fermentorba (a fermentor 18 1 tápközeget tartalmaz). A biomassza kiindulási koncentrációja 0,3 g/1. A fermentor rendelkezik keverőművel és mű-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
