192452. lajstromszámú szabadalom • Eljárás heteropoliszacharidok előállítására
1 192 452 2 2. táblázat Sóoldat %* NCIB NCIB 11 883 11 883 30 °C, 37 °C, szakaszos szakaszos tenyésztés tenyésztés 15 15 15 15 Hőmérséklet °C 30 60 30 60 1 g/1 konc.-jú oldat viszkozitása, 6,1-10-2 5,1—lO-2 (Pa.s) 7,5 s"1-nál 15,0.10-2 14,5.10-2 1 g/1 konc.-jú oldat viszkozitása, 3,2.10-2 2,7.10-2 (Pa.s) 23 s_1-nál 6,0—10-2 5,8.10-2 Hígítási faktor (2.10-2 Pa.s) 26,5 18,5 55 43 * 15% NaCl + 1,5% CaCl2 A pseudomonas NCIB 11 592 törzzsel 30 °C- on, szakaszos tenyésztéssel nyert polimer jellemzőit a 3. táblázatban ismertetjük. 3. táblázat Sóoldat % 15 15 Hőmérséklet °C 30 60 1 g/1 konc.-jú oldat viszkozitása (Pa.s) 7,5s_1-nál 7,9.10"2 5,5.10-2 23 s-i-nál 4,1.10-2 3,2.10-2 Hígítási faktor (2.10-2 Pa.s) 24,5 17,5 3. példa Poliszacharid termelés exponenciális utántáplálásos tenyésztéssel A táptalajt úgy állítjuk össze, hogy 1,2 g/1 NCIB 11 883 sejttömeg létrehozására legyen elegendő. Ennek az értéknek eléréséig a mikroorganizmus maximális sebességgel szaporodik (0,31 óra"1). A szaporodást ezt követően az exponenciálisan betáplált ammónium-szulfáttal szabályozzuk, úgy, hogy a mikroorganizmus szaporodási sebessége az előre meghatározott értéknek megfelelő legyen. A táp exponenciális betáplálást komputerrel szabályozzuk. Táptalaj g/1 (A) (NH4)2S04 0,6 g KH2P04 0,75 g (B) MgS04-7H20 0,4 g FeS04-l mol/1 0,05 ml CaCl2 • 2H20 0,012 g IPP nyomelem oldat 2,5 ml (C) Glukóz 20 g Az A, B és C táptalajkomponenseket autoklávban külön-külön sterilezzük, majd lehűlés után elegyítjük. Biotec fermentorban 2,5 1 fenti táptalajt 10% NCIB 11 883 inokulummal beoltunk, az inokulumot MOD-D2 táptalajon 30 °C-o i, pH 6,8-on, 24 órás rázott tenyészetben készítjük. A szaporodás exponenciálisan, maximális szaporodási sebességgel folyik körülbelül 1,2 g/1 száraz sejttömeg eléréséig. A fermentorban az ammóniaszintet ellenőrizzük, és az ammónium-szulfát exponenciális betáplálását 20 ppm alatti szintnél megkezdjük. A betáplálás sebességét úgy szabályozzuk, hogy az exponenciális szaporodási sebesség 0,064 óra"1 értékű legyen. A férméntlé 10 g/1 extracelluláris poliszacharid tartalmának eléréséhez körülbelül 28 óra fermentációs idő szükséges. A fajlagos polimertermelési sebesség 0,12 g/g, óra. Az átlagos termelékenység 0,35 g poliszacharid/1. 4. példa Folyamatos poliszacharid termelés NCIB 11 883 törzzsel A táptalaj azonos az 1. példában megadottal. Szaporodási körülmények: Az NCIB 11 883 törzset nitrogén korlátozással 3,1 1 hasznos térfogatú Biotec fermentorban tenyésztjük. A hőmérsékletet 30 °C-on tartjuk, a pH-t 2 n nátrium-hidroxid és 2 n kálium-hidroxid adagolásával 6,8 értéken tartjuk. A fermentorba 1 1/perc mennyiségű levegőt engedünk és 2 db 6—6 lapátos Rushton-keverővel 1000 fordulat/perc fordulatszámmal keverjük. A mikrodk-gan izmust különböző szaporodási sebességekkel tenyésztjük, és megfigyeljük a polimerképáődés kinetikáját. A Pseudomonas 11 592 és az NCIB 11 883 törzsek poliszacharid termelésének sebességét a 2. ábrán hasonlítjuk össze. Az NCIB 11 883 törzs fajlagos poliszacharid termelési sebessége 2—3- szor nagyobb, mint a Pseudomonas 11 592 törzsé. Ezen túlmenően — mint az a 4. táblázatban látható — az NCIB 11 883 törzs 1 g elfogyasztott glukózra, illetőleg elfogyasztott oxigénre vonatkoztatott poliszacharid termelése is jelentősen magasabb, mint a Pseudomonas 11 592 törzsé. A 4. táblázatban korlátozott nitrogénforrás mellett, egyensúlyi állandósult állapotban fennálló, a glukózra, illetve oxigénre vonatkoztatott poliszacharid hozam, sejttömeg és szén-anyagcsere adatokat összegezzük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 7
