192165. lajstromszámú szabadalom • Eljárás BBM-1644 jelű antibiotikum előállítására
1 192165 2 A BBM-I644 biológiai tulajdonságai A BBM-1644 baktériumellenes hatékonyságát agaron, felező hígítási sort alkalmazó módszerrel határozzuk meg. Tápagart használunk Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumokhoz; 4% glicerint tartalmazó tápagart használunk saválló baktériumokhoz és Sabouraud-agart gombákhoz. Az aktivitást formájában fejezzük ki és az eredményeket a neokarzinosztatinnal kapottakkal együtt a 6. táblázatban közöljük. A BBM-1644 hatásos gáltó aktivitást az agaron kapott legkisebb gátló koncentráció (MIC) mutat Gram-pozitív és saválló baktériumokkal szemben, de nem gátolja Gram-negatív baktériumok és gombák növekedését. A BBM-1644 baktériumellenes spektruma hasonló a neokarzinosztatinéhoz, azonban egyes kísérleti organizmusok esetében aktivitása felülmúlja a neokarzinosztatinét. 6. táblázat In vitro mikrobaellenes hatás ______________________________MIC (mcg/ml) Kísérleti organizmus BBM-1644 „«Statin Staphylococcus aureus FDA 209P 0,4 1,6 Staphylococcus aureus Smith 0,2 0,8 Streptococcus pyogenes A20 201 6,3 3,1 Micrococcus luteus PCI 1001 1,6 1,6 Micrococcus flavus D12 1,6 1,6 Bacillus subtilis PCI 219 0,8 3,1 Escherichia coli NIHJ >100 >100 Klebsiella pneumoniae D-l 1 >100 >100 Proteus vulgaris A9436 >100 >100 Pseudomonas aeruginosa A9930 >100 >100 Mycobacterium smegmatis 6 07 D87 12,5 50 Mycobacterium flei D88 3,1 12,5 Candida albicans IAM 4888 >100 >100 A BBM-1644 antibiotikumnak lizogén baktériumokban való profág-indukáló képességét (ILB) Lein és munkatársai szerint [Nature 196, 783-784 (1962)] határoztuk meg, vonatkoztatási vegyületként karzinosztatint használva. A plakk-számlálást (tarfolt-számlálás) a vizsgálandó anyagot (T) és kontrollt (C) tartalmazó agarlemezeken végezzük el. A plakk-számlálásnál a 3-nál nagyobb T/C arányt fogadjuk el szignifikánsnak és az ILB-aktivitást a vizsgálandó vegyület legkisebb indukáló koncentrációjával fejezzük ki. Amint a 7. táblázat mutatja, a BBM-1644 ILB-aktivitása hasonló a karzinosztatinéhoz; mindkettőnél a legkisebb indukáló koncentráció 1 mcg/ml. 7. táblázat A BBM-1644 lizogén baktériumokban való fágindukciója ILB-aktivitás (T/C)* (mcg/ml) 100 10 / 0,1 BBM-1644 10,4 10,3 6,0 1,2 Neokarzinosztatin 28,6 20,4 10,8 0,8 * Szignifikáns aktivitás: T/C >3,0 A BBM-1644 tumorgátló hatásosságát egéren (BDFj törzs) határozzuk meg P388 limfocitás leukémiával szemben. Minden egeret i.p. beoltunk 3 x 105 tumorsejttel. Az antibiotikumot osztott dózisokban i.p. adagoljuk az egereknek 24 órával a daganat beoltása után. A kezelést naponta egyszer alkalmazzuk az 1., 4. és 7. napon (A módszer), vagy 9 egymást követő napon (B módszer). A neokarzinosztatint vonatkoztatási tumorgátló szerként öszszehasonlítás céljából teszteljük és az eredményeket a 8. táblázatban foglaljuk össze. A BBM-1644 igen hatásos az egér-leukémiával szemben 0,03 ~ 1,0 mg/kg/nap dózistartományban, mindkét kezelési rendnél. A BBM-1644 tumorgátló aktivitása körülbelül azonos (B módszer) a karzinosztatinéval, vagy annál 3 x hatásosabb (A módszer), a legkisebb hatásos dózisok összehasonlítása alapján. 8. táblázat P388 leukémiával szembeni tumorgátló hatás T/C (%), MST* alapján Dózis: mg/kg/nap, i.p., A módszer / 0,3 0,1 0,03 0,01 BBM-1644 188 188 138 125 113 Neokarzinoszta tin 163 150 125 113 T/C (%), MST alapján Dózis: mg/kg/nap, i.p., B módszer 0,3 0,1 0,03 0,01 BBM-1644 125 175 138 113 Neokarzinoszta- ,,, ,,0 ... * MST = átlagos túlélési idő; szignifikáns aktivitás: T/ C£125% A BBM-1644 tumorgátló hatása P388 egérleukémiával szemben egy másik próbában is kimutatható, melynek eredményeit a 9. táblázat tartalmazza. A próbában alkalmazott módszer részleteit a Cancer Chemother. Rep. 3, 3. rész, 1-87 (1972) írja le. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
