192088. lajstromszámú szabadalom • Eljárás felületaktívanyag-hiány következtében fellépő légszomj kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmény előállítására
1 192.088 2 tünk 60 percig. 20UC hőmérsékleten 420 g oszlopkromatográfiás szilikagéllel. 4°C hőmérsékleten, tizenhat órás állás után leszlvattuk a felső részt és eldobtuk. A szilikagélt, amely az adszorbeált felületaktív-anyagot tartalmazta, a megmaradt felső rész leszívatása után megmostuk 1 I desztillált vízzel egy G—2 szűrőn. A felületaktív anyag elucióját 1,5 I kloroform/ metanol 2:1 arányú keverékével végeztük. A kloro formos fázist elválasztottuk és nitrogén-gázban szárazra pároltuk. Eredményként 515 mg anyagot kaptunk. 16. példa A 15. példa szerinti vizes extraktumból 8,4 l-t őszszekevertünk 30 percig, 20°C hőmérsékleten 500 g Florisil^-vel. 4°C hőmérsékleten 16 órás állási idő után leszívattuk a tiszta felső fázist és eldobtuk. A további feldolgozást a 15. példa szerint végeztük el. így 600 mg anyagot állítottunk elő. 17. példa A 15. példa szerint előállított darált tüdőből 2,5 got liofilizáltunk és három hetes hűtőben tárolás után a 15. példa szerinti vizes extraktummá feldolgoztuk. Ennek során a tüdő-liofilizátumnak az eredeti (kezdeti) friss súlyát beállítottuk. Kivonószerként a 15. példától eltérően glükóz oldatot (55 g/l) alkalmaztunk. A vizes extraktumból 7,1 l-t összekevertünk 60 percig 20°C hőmérsékleten 420 g oszlopkromatográfiás szilikagéltei. Az adszorbátumot a 15. példa szerint feldolgoztuk és így 310 mg anyagot kaptunk. 18. példa Az 1. példához hasonlóan darált tüdőt készítettünk 36,0 kg friss szarvasmarha tüdőből. Ennek a darált tüdőnek 500 g-jaihoz kevertünk 60 percig, 20° C hőmérsékleten 2.0— 2,0 I izotonikus nátrium-klojid oldatot, Dederon gézen leszűrtük ás a szűrletet 20 C hőmérsékleten 500 g fordulaton centrifugáltuk, majd 120 I vizes extráktumot állítottunk elő. 30—30 I extraktumot összekevertünk 60 percig, 20°C hőmérsékleten 2,5 kg Rorisi|R-vel. Az adszorpciót szer leülepedése után a felülúszót (egyenként 20 -28 I) ledekantáltuk ás ismételten összekevertük 60 percig, 20°C hőmérsékleten 2,0 kg Florisil^-vel. Az egyes Florisil-adszorbátumokat 5—5 I desztillált vízzel mostuk és 6,4—6,4 I kloroform/metanol 2:1 arányú keverékkel eluáltuk. A kloroformot fázisokat összeöntöttük és nitrogéngázban bepároltuk és így 12,2 g anyagot állítottunk elő. 19. példa A 15. példa szerint 500 g-os adagokban összekevertünk 9,35 kg friss szarvasmarha tüdőt 20°C hőmérsékleten 2,0-2,0 I izotonikus nátrium-klorid oldattal és ebből 31,7 I vizes extraktumot állítottunk elő. EbbőJ az extraktumból 23 l-t összekevertünk 60 percig, 20 C hőmérsékleten 1,5 kg Florisil^-vel. Az egyik felét 4 I csapvízzel, a másik felét3 I acetonnal mostuk. Ezt követően mindegyik részt kloroform/metanol 2:1 arányú elegyével eluáltuk, majd a kloroformos fázist leválasztottuk és nitrogén gázáramban szárazra pároltuk. A vízzel megmosott adszorbátumból 1,0 g anyagot, az acetonnal mosottból 0,62 g anyagot állítottunk elő. 20. példa A 19. példa szerint előállított extraktumból 8,0 I t összekevertünk 60 percig, 20 C hőmérsékleten 1,2 kg szilikagéllel. A felülúszót elválasztottuk, majd a felületaktív-anyagot tartalmazó szilikagélt 4 I csapvízzel mostuk és 2 I diklór-metán/metanol 2:1 arányú elegygyel eluáltuk. A szárazra bepérolt diklór-metán fázisból 442 mg anyagot állítottunk elő. 21. példa A 19. példa szerint előállított extraktumból 9,0 l-t összekevertünk 2 kg szilikagéllel, majd az adszorbátumot 10 I csapvízzel mostuk és a felületaktív-anyagot összekevertük 60 percig, 2,8 I kloroform/metanol 2:1 arányú elegyével és a felületaktív-anyagot eluáltuk. így 600 ml kloroformos fázist kaptunk. Ezt a fázist nitrogén-gázáramban szárazra pároltuk és így 1,3 g felületaktfv-anyagot állítottunk elő. 22. példa A 19. példa szerint előállított vizes extraktumból 3,0 l-t összekevertünk 0,68 kg szilikagéllel, amelyet a 19. példánál már alkalmaztunk, és amelyet 2NNaOH oldattal regeneráltunk, majd az adszorbátumot 1000 ml kloroform/metanol eleggyel 60 percig kevertük és •Kiéltük a felületaktív anyagot. így 960 ml kloroformos fázist kaptunk. Ezt a fázist nitrogén gázáramban szárazra pároltuk és (gy 0,6 g anyagot állítottunk elő. 23. példa Az 1. példa szerint előállított darált tüdőből 9,0 kgot 18 db 0,5 kgos adagra osztottunk és ezeket 2,0-2,0 I izotonikus konyhasó oldattal 10 perces erőteljes rázással extraháltuk, majd e tüdőmaradékokat müanyagszűrőn és dederon gézen elválasztottuk. A kapott 34 I extraktumot felhordtuk egy 2,0 kg Florisil^-vel töltött oszlopra (átmérő: 15 cm, az oszlop töltési magassága: 25 cm). Ezt követően 10,0 I desztillált vízzel mostuk és a hatóanyagot 7,5 I kloroform/metanol 2:1 arányú eleggyel eluáltuk. Egy éjszaki ülepítésután leszívattuk az eluátumról a metanolos fázist. A kloroformos fázist vákuumban szárazra pároltuk. így 2,65 g felületaktfv-anyagot állítottunk elő. 24. példa 20 g találmány szerinti hatóanyagot (foszfolipidtartalma: 60,1%) feloldottunk 200 ml denaturálatlan etanolbar», G—4 fritt üvegszűrőn előszűrtük (NK VII üvegszálas szűrőpapíron) és ezután SM 116-07 Sartorlus-szűrőn sterilen leszűrtük. A steril oldatot vákuumos rotációs bepérlóban koncentráltuk és steril nitrogér-gázáram bevezetésével, az edény egyidejű evakuálása közben az oldószer maradékot lehajtottuk. Az így kBpott steril anyagot egy Ultra-Turrax centrifugában 180 ml steril vízzel emulgeáltuk és az emulziót úgy töltöttük 25 ml-es gömbölyű szélű üvegekbe, hogy 17 üveg 400—400 mg foszfolipidet tartalmazott. Három napig -50°C hőmérsékleten fagyasztottuk, majd a mintákat llfilizáltuk, miközben az ellenáramú fűtést maximálisan 20°C hőmérsékletre állítottuk. Liofilizélás után az üvegeket B-180-as átlyukasztott dugóval és alumíniumkapszula zárral lezártuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
