191990. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált vinil-3-cefém-4-karbonsav-származékok előállítására
39 19)990 40 szennyezéseket tartalmaz. Az 5% metanolos eluátum másik felét 5 ml-re bepárolva és liofilizálva a 37. vegyület, a 42. vegyület és vizeletből származó szennyezések keverékéből álló 36 mg terméket kapunk. A 10X metanolos eluátumot (körülbelül 600 ml) 5 ml-re bepárolva és liofilizálva 38 mg 42. vegyületet (HPLC alapján 70% tisztaságú) kapunk, melyet a fenti töltetet tartalmazó oszlopon (40 ml) újra kromatografálunk, vízzel, 5% metanollal és 10% metanollal eluálva. A 10% metanollal eluált kívánt frakciókat egyesítjük, és 5 ml-re bepárolva és liofilizálva 16 mg 42. vegyületet kapunk, amely HPLC alapján 90% tisztaságú (0,0M acetátpuffer (pH 4)-acetonitril (85:15)]. Olvadáspont 180 °C (fokozatos bomlás). IR (KBr): ó»ax 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360 cm*1. UV (foszfátpuffer pH 7): Xuax nm (£) 233 (8200), 280 (8800). NMR (DzO): & ppm 1,68 (3H, d, J=6Hz,-C-CHs), 3,26 (1H, d, J=18Hz, 2-H), 3,58 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,01 (3H, s, OCHa), 5,12 (1H, s, CH-CO), 5,21 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,78 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C-), 5,98 (1H, d, J=llHz, CH=C-), 7,07 (2H, s, fenil-H), 7,17 (1H, széles s, fenil-H). A metabolit szerkezetét 7ß-[D(-)-2-amino-2-(4-hidroxi-3-metoxi-fenil)-acetamido]-3- -[(Z)-l-propen-l-il]-3-cefem-4-karbonsavként azonositjuk, a 34-38. eljárással előállított 42. vegyülettel való összehasonlítás (NMR, IR, UV, HPLC) alapján. 40. eljárás DL-2-N-terc-butoxi-kar bonil-amino-2- ( 3- -hídroxi-fenil)-ecetsav 2 2 g (0,12 mól) DL-2-(3-hidroxi-fenil)-glicin és 2,6 g (0,012 mól) di-terc-butil-dikarbonát 40 ml 50%-os, vizes tetrahidro-furánban (THF) készített elegyéhez 3,4 ml (0,024 mól) trietil-amint adunk, és az elegyet szobahőmérsékleten 5 órán át keverjük, majd kb. 20 ml-re pároljuk be, 50 ml éterrel mossuk, 40%-os foszforsavval megsavanyítjuk és kétszer 100-100 ml éterrel extraháljuk. Az egyesített extraktumokat vízzel, majd telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, aktívszénnel kezeljük, majd bepároljuk. Ily módon olajat kapunk, melyet n-hexánnal triturálva 2,7 g (84%) cím szerinti terméket nyerünk. Op.: 144-148 °C (bomlás). IR-spektrum, nü»ax (KBr): 1760, 1630, 1590, 1560, 1370, 1340, 1290, 1250, 1210, 1160 curb UV-spektrum, lambdaouui (MeOll), nm epszilon: 276 (2300), 282 (2000). NMR-spektrum, delta (CDCto+DMSO), ppm: 1,42 (9H, s, C-CH3), 5,13 (111, d, J=7 Hz, Ctf-NH), 5,82 (111, d, J=7Hz, N//-CH), 6,8-7,3 (411, m, fenil-H ); Analízis a CuIlnNOs képlet alapján: számított: C: 58,42, H: 6,41, N: 5,24%; talált: C: 58,73, H: 6,70, N: 5,17%. 41. eljárás Benzhidril-7-[DL-2-N-terc-butoxi-karbonil-amino-2-( 3-hidroxi-fenil )-acetamido]-3- -[(Z)-l-propenil]-3-cefem-4-karboxilát 443 rag (1 mmól) benzhidril-7-amino-3- -[(Z)-l-propenil]-3-cefem-4-karboxilát-hidroklorid etil-acetát-THF (10:1) elegyével (55 ml) készített szuszpenzióját 50 ml nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal erősen rázatjuk. Ezután a szerves fázist elválasztjuk, vízzel, majd telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, és kb. 30 ml-re pároljuk be. A koncentrátumhoz 320 mg (1,2 mmól) DL-2-N- te rc-butoxi-kar bonil-amino-2-(3-hidroxi-fenil )-ecetsav és 250 mg (1,2 mmól) N,N’-diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten félórán ét keverjük, majd leszűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk, és a kapott maradékot oszlop-kromatográfiásan (Kiesel gél 60, Merck, 30 g) eluensként toluol-etil-acetát (4:1) elegyet alkalmazva tisztítjuk. A frakciókat vékonyréteg-kromatográfiásan ellenőrizzük, és a kívánt terméket tartalmazókat egyesitjük, majd szárazra pároljuk, és így maradékot kapunk, melyet éter-izopropil-éter-n-hexán eleggyel triturálva 627 mg (95%) cím szerinti terméket nyerünk. Op.: 120 °C (bomlás). IR-spektrum, nü«,a* (KBr): 1780, 1710, 1690, 1590, 1500, 1370, 1220, 1160 cm*1. UV-spektrum, lambdamax (MeOH), nm (epszilon): 283 (9900). 42. eljárás 7-[D-2-Amido-2-(3-hidroxi-fenil)-acetamido]-3-[(Z)-l-propenil]-3-cefem-4-karbonsav 600 mg (0,91 mmól) benzhidril-7-[DL-2- -N-terc-butoxi-kar bonil-amino-2- (3-hidroxi-fenil)-acetamido]-3-[(Z)-l-propenil]-3-cefem-4-karboxilát, 0,5 ml anizol és 2 ml Lrifluor-ecetsav (TFA) elegyét szobahőmérsékleten 10 percen át keverjük, majd 50 ml éter-izopropil-éter (1:1) eleggyel hígítjuk. A kapott csapadékot kiszűrve 438 mg (95%) nyersterméket kapunk, melyet prepPAK-Cis (Waters) töltetű oszlopon kromatografálunk, az eluciót vízzel, 5%-os metanollal és 10%-os metanollal végezve. Az eluátumokat HPLC-vel követjük, és az 5% metanollal eluált frakciókat bepároljuk. A 153 mg maradékot ismételten kromatografáljuk, 300 ml-es oszlopon, eluensként 10% metanolt alkalmazva, és ily módon 57 mg nyers D-izomert. kapunk. A 10% metanollal kapott frakciókat, összegyűjtjük, kb. 10 ml— 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 21
