191990. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált vinil-3-cefém-4-karbonsav-származékok előállítására
37 191990 38 36. eljárás Benzhidril-7ß-[D(-)-( íerc-butoxi-karbonil-amino)-2-(4-hidroxi-3-metoxi-fenil)-acetamido]-3-trifenil-foszfónium-metil-3-cefem-4- -karboxilát-jodid (40. vegyület) (18 képlet.) 7 g (0,01 mól) 39. vegyület és 7,5 g (0,05 mól) NaJ keverékét 100 ml acetonban szobahőmérsékleten 30 percig keverjük és szárazra pároljuk. A maradékot 200 ml etil-acetátban oldjuk és az oldatot vizes Na2Sz03-oldattal, vízzel és telített NaCl-oldattal mossuk, MgSO* felett szárítjuk és 100 ml-re bepároljuk. A maradékhoz 3,1 g (12 millimól) trifenil-foszfint adunk és a keveréket szobahőmérsékleten 1 óráig keverjük. A reakcióelegyhez 100 ml étert adunk és a kivált szilárd anyagot szűréssel összegyűjtjük, éterrel mossuk és megszárítjuk. A 40. vegyület 5,8 g trifenil-foszfónium-származékát kapjuk. Az éteres szűrletet 10 ml-re bepárolva és 300 ml étert hozzáadva további 0,9 g terméket kapunk. A teljes kitermelés 6,7 g. 37. eljárás Benzhidril-7/3-[D-(-)-2-(terc-butoxi-karbonil-amino)-2-(4-hidroxi-3-metoxi-fenil)-acetamido]-3-[(Z)-l-propen-l-il]-3-cefem-4- -karboxilát (41. vegyület) (19 képlet) 5,8 g (5,5 millimól) 40. vegyület, 10 ml 90% acetal dehid és 100 ml kloroform keverékéhez keverés közben, cseppenként, 25 perc alatt 11 ml (5,5 millimól) 0,5n NaOH-oldatot adunk és a keveréket szobahőmérsékleten 2 óráig keverjük. A reakcíóelegyet vízzel, majd telített NaCl-oldattal mossuk, MgSOí felett szárítjuk és szárazra pároljuk. Az olajos maradékot szilikagél-oszlopon (Kieselgel 60, 130 g) kromatografáljuk toluol/etil-acetát eleggyel [az arány fokozatosan változik; 4:1 (1,3 liter), 3:1 (1,1 liter), 2:1 (1,0 liter)] és az eluátumot 20 ml-es frakciókban gyűjtjük össze. A 26-59. frakciót egyesítve és szárazra párolva 830 mg kívánt 3-propenil-származékot (41. vegyület) kapunk habos szilárd formában. NMR (CDCb): <5 ppm 1,35 (3H, d, =CH-Ctfj), 1,4 (9H, s, C-CH3), 3,85 (3H, s, O-CHs), 6,07 (1H, d, J=ll Hz, -CH=C). 38. eljárás 7/l-[D(-)-2-Amíno-2-(4-hidroxi-3-metoxi- fenil )-acetamido]-3-[ (Z)-l-propen-l-i)]-3-cefem-4-karbonsav (42. vegyület, BMY-28 097) (20 képlet) 830 mg (1,2 millimól) 41. vegyület, 0,5 ml anizol és 2 ml trifluor-ecetsav keverékét szobahőmérsékleten 5 percig keverjük, és a keveréket 30 ml éterrel és 30 ml izopropil-éterrel hígítjuk. A képződött csapadékot szűréssel összegyűjtjük, izopropil-éterrel mossuk és megszárítjuk. A 42. vegyület 437 mg súlyú nyers trifluor-acetátját kapjuk. A nyers terméket prepPAK-Cis patron (Waters) 100 ml töltetét tartalmazó oszlopon kormatografáljuk, vízzel és 5% metanollal eluálva. Az 5% metanolos eluátumot 5 ml-re bepárolva és liofilizálva 225 mg 42. vegyülçtet (ikerion, 90% tisztaságú) kapunk. Olvadáspont 176-180 °C (bomlás). IR: -CW 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280 cm'1. UV (foszfátpuffer pH 7): Xmax hm (£) 235 (10 000), 280 (11 000). NMR (D2O): & ppm 1,68 (3H, d, J=6Hz, C-CHs), 3,25 (1H, d, J=18Uz, 2-H), 3,57 (1H, d, J=18Hz, 2H), 4,01 (3H, s, OCHs), 5,10 (1H, s, CH-CO), 5,19 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,78 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C), 5,98 (1H, d, J=llHz, CH=C), 7,07 (2H, s, fenil-H), 7,17 (1H, széles s, fenil-H). HPLC: retenciós idő 9,3 min [15% acetonitrilt tartalmazó 0,02M acetátpuffer (pH4)]. 39. eljárás A 42. vegyület izolálása 37. vegyülettel etetett patkányok vizeletéből 6 darab hím Wistar patkányt (400-600 g) acél anyagcserevizsgálati ketrecekben helyezünk el a 37. vegyület 100 mg/kg orális dózisának beadása után és a vizeletet 24 órán át gyűjtjük. A patkányokat a kísérlet alatt szokványos étrenden és vízen tartjuk. Az alábbi táblázat az idöról-idöre összegyűjtött vizelet térfogatát mutatja. 0-2 h 2-4 h 4-6 h 6-24 h Öszszesen Vizelet 18 19.5 13 42 92.5 térfogat (ml) A vizelet (körülbelül 90 ml) pH-ját In sósavoldattal 3-ra állítjuk be és a csapadék eltávolítása céljából átszűrjük. A szűrletet 300 ml HP-20 gyantával megtöltött oszlqpon kromatografáljuk, 2 liter vízzel és 2 liter 30% metanollal eluálva HPLC ellenőrzés mellett. A 30% metanolos eluátum bioaktív komponenseit tartalmazó frakciókat összegyűjtve, 10 ml-re bepárolva és liofilizálva 390 mg barna szilárd anyagot kapunk. Az utóbbit 20 ml vízben oldjuk és az oldatot prepPAK-Cis patron (Waters) 200 ml töltetével megtöltött oszlopon kromatografáljuk, egymás után vízzel, 5% metanollal és 10% metanollal eluálva. Az 5% metanolos eluátum első felét 5 ml-re bepárolva és liofilizálva 4 4 mg 37. vegyületet (70% tisztaság) kapunk, amely vizeletből származó 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 20
