191966. lajstromszámú szabadalom • Takarmányadalék és eljárás annak előállítására
5 191966 6 magyar szabadalmi leírásokból váltak publikussá. A találmány szerinti eljárásban I általános képletű vegyületként előnyösen az alábbiakat használhatjuk: l-(4-fluor-fenil)-l-(2-benzil-oxi-fenil)-propán-l-ol, l-(2,5-dimetil-fenil)-l-(2-benzil-oxi-fenil)-propán-l-ol, 1- ( 3-trifluor-metil-f enil )-1 - [4- (dietil-karbamoil-metoxi)-fenil]-propán-l-ol, 1- ( 3-klór-f enil )-1- [ 2- ( dietil-karbamoil-metoxi)-fenil]-propán-l-ol, l-(3-klór-fenil)-l-[2-(etoxi-karbonil-metoxi)-fenil]-propán-l-ol, 1- ( 3-trif luor-metil-fenil )-1- [ 4- ( 2-/piperidin-l-il)-etoxi]-fenil/-propán-l-ol, 1- ( 3-trif luor-metil-fenil )-1- [ 4- ( 2- dimetil-amino-etoxi]-fenil/-propán-l-ol, l-(2-metoxi-fenil)-l-[4-(2-pirrolidin-l-il)-etoxi-fenil]-propán-l-ol, l-(4-fluor-fenil)-l-[4-(2-/piperidin-l-il)-etoxi-fenil]-propán-l-ol. A találmány szerinti effektust az alábbiakban igazoljuk: 1. Kísérleti állatok, kísérleti elrendezés A vizsgálatot olyan nagyüzemi sertéstelepen végeztük, ahol 40 kg-os élőtesttömeg eléréséig a sertések takarmányába 25 mg/testsúly kg Carbadoxot kevernek. Egy ilyen takarmányt fogyasztó populációból egyedi mérlegeléssel 27, pontosan 40 kg-os állatot választottunk ki és azokat a vizsgálathoz alkalmas külön helyen elrekesztettük. Ettől az időponttól kezdve - amelyet egyébként a kísérlet induló (0) pontjának tekintettünk - az állatok ugyanazt a tápot fogyasztották mint korábban, de Carbadoxtól mentesen. A 27 állatot 3 csoportba soroltuk, az alábbiak szerint: I. csoport: 12 állat (1-12-ig terjedő sorszámmal) -Vágásuk: 3-3 db a 0 időpontban, az 1., és 5. és a 15. napon (Pozitív kontroll csoport) II. csoport: 9 állat ( 13—21—ig terjedő sorszámmal) Kezelésük: egy alkalommal a 0 időpontban 40 mg/testsúly kg flumecinollal Vágásuk: 3-3 db az 1., az 5. és a 15. napon (Flumecinollal 1-szer kezelt csoport) III. csoport: 6 állat (22-27-ig terjedő sorszámmal) Kezelésük: 3 napon át, a 0 időpontban, valamint az 1. és 2. napon, 40 mg/testsúly kg flumecinollal Vágásuk: 3-3 db az 5. és a 15. napon. (Flumecinollal 3-szor kezelt csoport) A flumecinol 19,02% hatóanyagtartalmú mikropellet formájában állt rendelkezésünkre. Ebből 1%-os keményitónyálkával olyan szuszpenziót készítettünk, amelynek 1 ml-e 40 mg flumecinolnak megfelelő mennyiségű mikropelletet, tehát 1 testsúly kg-ra jutó dózist tartalmazott. Beadása előzetes koplaltatás nélkül, reggel 8 órakor történt, gyomorszondán keresztül. E beadási módot a kezelések pontosságának a biztosítására választottuk. A vágásokra és mintavételekre reggel 8 és 11 óra között került sor, amelyet követően a minták 1 órán belül, hütőlánc segítségével a vizsgáló laboratóriumba kerültek. 2. Vizsgált paraméterek és meghatározási módszerük Valamennyi csoportban, minden vágási időpontban 3-3 állat combizom, hosszú hátizom (karaj), máj és vese szövetét vizsgáltuk meg kinoxalin-2-karbonsav jelenlétére. A szermaradék meghatározásán kívül, valamennyi izom és máj mintából elvégeztük az érzékszervi vizsgálatot (föző-próbát) is. A kinoxalin-2-karbonsav mennyiségi meghatározásának alapját az USDA Chemistry Laboratory Guidebock-ban megjelent (5007. Determination of Carbadox) módszer képezte, amelynek lényege a következő: Az izom, a máj és a vese minta lúgos hidrolízise után a hidrolizátumot erősen megsavanyítottuk és a kinoxalin-2-karbonsavat etilacetátos fázisba vittük át. Az etilacetátos kivonat pH-értékét citromsav-pufferrel 6-ra állítottuk be, majd benzolos kivonást végeztünk. Következő lépés az n-propanol + kénsav reagens hozzáadásával történő észterezés volt, amikor kinoxalin-2-karbonsav-propilészter keletkezett. Ennek mennyiségi meghatározása - előzetes vékonyrétegkromatográfíás tisztítás után - gázkromatográfiás módszerrel történt. E bonyolult és sok művelettel járó vizsgáló eljárást minden esetben együtt végeztük olyan negatív kontroll mintával, amelyhez ismert mennyiségű (0,2 /ug-1,0 Mg) kinoxalin-2-kar bonsavat adtunk (standard). Az ezen mintából történő hatóanyag-visszanyerési százalékot a vizsgálati minták szermaradékmennyiségének kiszámításánál figyelembe vettük, igy az eljárás hibája kiküszöbölhető. A vizsgálatok eredményeit pg/kg mértékegységben adtuk meg, 3. Eredmények A kinoxaiin-2-karbonsav mennyiségét az egyes vágási időpontokban 3-3 állat vizsgált r> 10 15 20 .25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
