191944. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antimikrobás aktivitású benzoesav-származékok előállítására
9 191944 LO I. Táblázat (I) általános képletű vegyület A vegyület jele A szubszt. helyzete X A-OH R Előáll. mód példa sorszáma Jellemzési mód Op. (°C) ill. spektr. SR 41945 P(CH2)sOH H 1 104-106 CM 41093 P-(CH2CH/OH/-nC3H7 H 3 128-130 CM 40937 P 0 (CHzlsOH H 5 105-115 SR 41709 P(CH2)sOH C2H5 2 NMR CM 41094 P(CH2CH/OH/-nC3H7 C2H5 4 NMR CM 40939 P(CH2)sOH C2H5 5 NMR NMR spektroszkópiai adatok (pmm):- SR 41709: 1,1-1,9 (9H, széles, HO- 2Q-CH2(Cfl2)3-CH2 és C02-CH2-C/Í3), 2,6 (2H, t, J = 7 Hz, -CH2-Cfl2-CsH4), 3,6 (2H, t, J = 6 Hz, HO-CT/2-CH2-), 4,3 (2H, qa, J = 7 Hz, -C02-CT2-CH3), 7,2 (2H, d, J = 9 Hz, H-orto CHz), 8 (2H, d, J = 9 Hz, 25 H-orto CO2); ,- SR 41094: 0,7-1,7 (11H, széles, CH3-CH2--OT2-CH/OH/, -C02-CH2-CÄ3), 2,6-2,9 {2H, m, -CH/OH/-CT2-C6H4), 3,6-4 UH, m,-CH2-CH/OH/-CH2), 4,3 (2H, qa, J = 7 Hz, 30-CO2-C//2-CH3), 7,3 (2H, d, J = 9 Hz, H-orto CII2), 8 (2H, d, J = 9 Hz, H-orto CO2);- CM 40939: 1,3 (3H, t, J = 7 Hz,-CO2CH2C//3), 1,4-1,9 (6H, széles, HO-CHz- 35-CHl-CHz- C//2-CII2-O- ), 3,6 (2H, t, J = 6 Hz, -CH2-CH2-O-C6H4), 4 (2H, t, J = 6 Hz, HO-Cfft-CHz), 4,3 (2H, qa, J = 7 Hz, CO2C//2CH3), 6,9 (2H, d, J = 9 Hz, H-meta CO2), 8 (2H, d, J = 9 Hz, H-orto COz). A találmány szerinti vegyületek baktericid hatását különböző törzseken az alábbiak szerint határoztuk meg. A vizsgálandó vegyület különböző higi- 45 tásaival meghatározott ideig baktérium inokulumot kezelünk. Az érintkeztetési periódus végén a baktérium szuszpenzió - vizsgált vegyület keverékének' alikvot részét olyan agar táptalajra helyezzük, amely a vegyület 50 baktérium-ellenes hatását semlegesíti. Meghatározzuk a minimális baktericid koncentrációt - ug/ml-ben kifejezve -, amely koncentrációnál nagyobb érték esetén a baktériumok nem növekednek. 55 Az alábbi baktérium törzseket használtuk: (1) Escherichia coli (2) Klebsiella pneumoniae (3) Pseudomonas aeruginosa (4) Streptococcus faecalis (5) Staphylococcus aureus A második törzset Wogel Fergusson táptalajon, mig a többit tripszines szója agar- 65 -Difco (TSA) táptalajon tartjuk. A Wogel Fergusson táptalaj összetétele: Nátrium-klorid 2 g Kálium-szulfát 1 g Magnézium-szulfát 0.25 g Szacharóz 20 g Élesztőkivonat 2 g Agar 15 g Desztillált vízzel 1 literre kiegészítve, 120 °C-on 15 percig sterilizálva. A telepeket 37 cC-on 24 órán át tenyésztjük, majd üveggyöngyökkel és 1000 ml desztillált vízben 1 g triptont, valamint 8,5 g nátrium-kloridot tartalmazó oldat 10 ml-nyi oldatával összegyűjtjük. A kapott szuszpenziót keverjük, és a fény-transzmisszió intenzitást (%-ban kifejezve) 620 mm hullámhoszszon spektrofotometriásán mérjük. Eredményeinket az alábbiakban foglaljuk össze: 1. sz. törzs: 70% 2. sz. törzs: 80% 3. sz. törzs: 70% 4. sz. törzs: 60% 5. sz. törzs: 60% A baktérium-inokulum olyan szuszpenziónak felel meg, amelynek koncentrációja 1/20-a ezen baktérium szuszpenziónak. Üregeket tartalmazó lemezekre a vizsgált anyag különböző hígításait helyezzük. A vizsgált vegyület különböző hígításaival több helyű inokulátort használva különböző baktérium szuszpenziókat kezelünk. 20 perces érintkezési időszak után Petri-csészébe helyezett olyan agar-s.gar (TSA) táptalajra, mely a vegyület hatását közömbösítő szert - 1000 ml TSA-ban (Difco) 20 g Lubrol W-t [oc-hexadecil-w-hidroxil-poli(oxi-l,2-eténdiil)], 2.5 g Tween 80-at felületaktív anyag és 2.5 g nátrium-tioszulfátot - tartalmaz, az inokulátorral alikvot részeket viszünk. A közömbösítő szer hatékonyságát minden vizsgált vegyület esetén olyan módon ellenőrizzük, hogy a vizsgált vegyület hígításának alikvot részét a táptalajra helyezzük. A megfelelő inokulumot ugyanarra a helyre visszük. Agar-agar táptalajon közömbösítő szerrel és anélkül inokulum-kontrollt készítünk. Az eredményeket - melyeket a 2. táblázatban foglalunk össze - 37 °C-on végzett 48 órás inkubáció után határoztuk meg. CNCM 54125 RO30 kapszulázott 60 CNCM A22 CNCM 5855 CNCM 53154 6
