191858. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil plurilamelláris vesiculumok előállítására
Bár mindkét esetben a spin szonda a kettősréteg azonos mélységéről ad jelt, az SPLV szignifikánsan magasabb molekulapálya fokkal és molekuláris mozgással rendelkezik, mint az MLV. Az SPLV és MLV közötti eltéréseket illuszt- 5 rálja az aszkorbálási képesség, mely redukálja a doxil spin szondát. Hosszú ideje jól ismert tény, hogy az aszkorbát csökkenti a doxil mennyiséget, feltehetően a hidroxilamin analógjához hasonlóan, amely nem abszorbeálja mágneses 10 mezőben a mikrohullámú energiát. Vizes oldatban a redukció gyorsan megtörténik, a kísérő ESR jel eltűnésével. Amennyiben a spin szonda védett környezetben, így lipid kettősrétegben helyezkedik el, az jóval lassabban vagy egyálta- 15 Ián nem csökken a hidrofil aszkorbátok által. Ennek megfelelően a nitroxid redukciója az aszkorbátnak a lipid kettősrétegekbe történő penetrálási sebességének tanulmányozására használható. A 3. ábra az SPLV és MLV aszkorbát 20 oldatos szuszpenziójának %-os spin fordulási idejét mutatja. 90 perc elteltével az MLV-be ágyazott szonda aszkorbátja 25%-ra csökkent, 60%-a a szondának azonban az SPLV-be ágyazódott be. Az SPLV lényegesen nagyobb asz- 25 korbát penetrabilitást tesz lehetővé, mint az MLV. 1 191 858 Az SPLV egy másik egyedülálló tulajdonsága, hogy az a sejtekkel kölcsönhatásba lép, ily módon a vesiculumokba foglalt kapszulázott anyag viszonylag nagyobb mennyisége diszpergálódik a sejtek citoplazmáján keresztül, ez a mennyiség a fagocita vesiculumok limitálta értéknél nagyobb. Az SPLV sejtekkel történő keverése során a két anyag egyesül. Az egyesülés oly módon valósul meg, hogy az SPLV az MLV-től eltérően in vivo körülmények között a sejtekkel kölcsönhatásba lép, olyannyira, hogy mindegyik sejt legalább néhány olyan anyagot tartalmaz, mely eredetileg az SPLV-be beépült. Ez az anyag megoszlik a sejtek között, és a beépülést a fagocita vesiculumok nem limitálják. Ez a jelenség a ferritinnek valamely SPLV készítmény vizes fázisába történő beépítésével mutatható be. A sejttel történő egyesülés után a finom szerkezet analízis azt mutatja, hogy a ferritin a citoszólon keresztül szétoszlik, és nem kötődik meg az intracelluláris membránokon. Ez a jelenség az MLV esetében is kimutatható, azonban az SPLV az adott anyag egy nagyobb mennyiségének transzferjét biztosítja. Az SPLV sűrűsége 2 Az SPLV és a sejtek kölcsönhatása IV. táblázat Az SPLV és az MLV ESR karakterisztikája Tau S SPLV 2,65 x 10"® másodperc 0,614 14,9 MLV 3,65 x 10"® másodperc 0,595 14,9 Aktív anyag SPLV-be történő beépülése Az SPLV-nek a tradicionális MLV-től eltérő, kiugróan kedvező tulajdonságát az is mutatja, hogy az valamely aktív anyag %-osan nagyobb mennyiségét képes magába zárni, ily módon konzerválni, (lásd V. táblázat) V. táblázat MLV és SPLV összehasonlítása Beépült anyag %-ába MLV n kifejezve SPLV Kapszulázott anyag: inulin (vizes térben) 2-6 % 20-30% szarvasmarha szérum albumin 15 % 20-50 % streptomycin 12-15 % 20-40 % polivinilpinolidin (vizes téren) 5 % 25-35 % 30 Az SPLV sűrűsége az MLV-nél jóval alacsonyabb. A VI. táblázat a ficol grádiens rétegeződéssel mért értékeket mutatja. 35 VI. táblázat Sűrűség MLV SPLV ficol felső réteg 1 % felső réteg 0,5 % gms|ml 1,071 1,0274 Az SPLV térfogata 45 1,000—100,000 x g centrifugálással összegyűjtve az SPLV gömböt képez, mely ugyanolyan foszfolipid koncentrációjú mint az MLV, a mérete azonban annál lényegesen nagyobb. 50 16,000 x g erőnél a kapott SPLV gömb mérete az MLV méreténél közel egyharmaddal nagyobb. Az SPLV ozmotikus tulajdonságai 55 Mivel a foszfolipid kettősrétegek a víz számára permeábilisak, az MLV-t hipertóniás környezetbe helyezve a bezárt vízre ozmotikus erő hat. Az SPLV az MLV-nél nagyobb mértékben húzódik össze. 16 órás pufferes kezelés után a belső só- 60 koncentráció 20-szor magasabb, az SPLV nem ugyanarra a végtérfogatra húzódik össze, mint az MLV. (Az SPLV gömbök egyharmaddal nagyobbak maradnak, mint az MLV gömbök.) Ez azt mutatja, hogy a gömbméret differenciák nem a 65 bezárt víz térfogati eltéréseinek tulajdoníthatók. 9
