191858. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil plurilamelláris vesiculumok előállítására
VII. táblázat 1 191 858 Intracellulär is Brucella izolátumok telepegységei streptomycin- tartalmú SPLV- fertőzött makrofágokkal történt kezelés után B. canis3 B. abortus^ Kontroll 2.6±1.13xl03 3.1±0.81xl04 Puffer-telített SPLV 2.82*0.lOxlO3 2.9±0.17xl04 Szabad streptomycin 3,ll+0.40xl03 3.3±0.25xl04 Streptomycin * Puffer-telített SPLVC 2.76+0.20xl03 2.8±0.42xl04 SPLV-be épített streptomycin0 0 0 a Telep képező egységek (CFU) B. canis esetében (12 replikátum). Az izolátumokat előzetesen fertőzött egerek (Cs7Blk) peritoniális makrofágjaiból nyertük. b Azonos számú előzetesen fertőzött tengeri malac peritoneális makrofágjai. B. abortus CFU (12 replikátum). c Streptomycin koncentráció 1 mg/ml. Intracelluláris fertőzések kezelése Az alábbiakban az SPLV alkalmazását mutatjuk be intracelluláris fertőzések kezelésében. A kapott adatok az alábbiakat mutatják be: 1. az SPLV-be kapszulázott antibiotikum hatékonysága a terápiában, 2. az SPLV készítmény multiplex dózis adagolása kapott megnövekedett hatékonyságot. A vehiculumként alkalmazott MLV és SPLV összehasonlítását a protocollban ismertetjük. A brucellosis világszerte komoly gazdasági és közegészségügyi problémákat okoz. A brucellosist a Brucella spp. okozza. A brucellosis átterjedhet számos emlősre, így emberre, háziállatokra és különböző vadállatokra. Az alábbi hat Brucella spp. vált ki brucellosist állatokban: B. abortus, B canis, B. melitensis, B. neotomae, B. ovis és B. Suis. Mind a házi, mind a vadállatok a brucellosis potenciális bacilusgazdái lehetnek. A fenti fertőzések antibiotikumokkal nem kezelhetők, mivel a fertőző mikroorganizmus a sejt retikuloendoteliális rendszerén belül marad, és az antibiotikum baktérumölő hatásának ellenáll. Az antibiotikum dózisnagysága és a kezelés időtartama toxikus hatásokat és az állati szövetekben nem kívánt, magas antibiotikum koncentrációt eredményez. A fenti betegségek terápiájának további nehézsége, hogy a visszamaradt fertőzéssel (amely szétszóródik) és a fertőzési ciklussal számolni kell. Az ilyen megbetegedések gazdasági hátránya a szarvasmarha tenyészetekben bekövetkező spontán abortuszok miatt dollármilliókra tehető. Az alábbiakban valamely antibiotikum SPLV- be beépítését mutatjuk be, majd a kapszulázott aktív anyaggal történő kezelést ismertetjük fertőzött állatok intraperitoneális kezelésekor. B. canis fertőzés kezelése SPLV-be épített antibiotikummal Nyolcvan felnőtt him Swiss egeret intraperitoneáhsan (I.P.) B. canis ATCC 23365 (1 x 107 CFU) tenyészettel fertőztünk és nyolc csoportot alakítottunk ki, a csoportok mindegyike tíz egeret tartalmazott. B. canis-sal történő inokulálás után 7 nappal a csoportokat az alábbiak szerint kezeltük: 1. csoport — kezelést nem kapott, kontroll; 2. csoport — puffer-telített SPLV-vel kezelt (0.2 ml I.P.); 3. csoport — vizes streptomycin-szulfáttal kezelt (lmg/kg testsúly, teljes mennyiség: 0,2 ml I.P.); 4. csoport - vizes streptomycin-szulfáttal kezelt (5 mg/kg testsúly) teljes mennyiség: 0,2 ml I.P.: 5. csoport — vizes streptomycin- szulfáttal kezelt (10 mg/kg testsúly), teljes mennyiség 0,2 ml I.P; 6. csoport — streptomycin-szulfát tartalmú SPLV-vel kezelt (lmg/kg testsúly) teljes mennyiség: 0,2 ml I.P; 7. csoport — streptomycin-szulfát- tartalmú SPLV-vel kezelt (5 mg/kg testsúly) teljes menynyiség: 0,2 ml I.P; 8. csoport — streptomycinszulfát-tartalmú SPLV-vel kezelt (10 mg/kg testsúly) teljes mennyiség: 0,2 ml LP; B. canissal történő inokulálás után 14 nappal valamennyi állatot megöltük, és a lépet aszeptikusán eltávolítottuk. A lépet homogenizáltuk, hígítási sorozatot készítettünk, azt brucella agarra vezettük, és meghatároztuk a túlélő B. canis számot a kezelés után a lépben. A négynapos inkubálás után kapott eredményeket a VIII. táblázat mutatja. VIII. táblázat 2 Különböző koncentrációjú szabad, vagy SPLV-be zárt streptomy cinnel végzett kezelés a hatékonysága B. canis-sal fertőzött egereken Telepképző egységek B. canis/lépb Kontroll Kezeletlen 3.46x106±2.7x106 Puffer-telített SPLV 4.1x106±0.66x104 Streptomycin-Szabad SPLV-be zárt koncentráció streptomycin streptomycin (mg/kg testsúly) 1 1.5±0.45xl06 1.01±0.25xl03 5 2.12±1.71xl05 1.52±0.131xl04 10 9.66±3.68xl04 1.32±1.00xl04 a) I.P. injekció teljes térfogata: 0,2 ml (steril saline) b) A túlélő B. Canis mennyiségét izolált lép (CFU értékben adtunk meg, és tíz állat ± S. D. (kísérlet hányadosban fejeztük ki (háromszor ismételt vizsgálat). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 13
