191832. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antiateroszklerotikus hatású 1-piperazin-származékok és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
7 191832 8 Patkánymellékveséket 0,2 m monobázisos káliumfoszfát pufferben (pll=7,4) homogenizálunk és 1000 g mellett centrifugálunk 15 percig 5 °C-on. A felülúszó, amely mikroszómás frakciót tartalmaz, köles zterinészterező enzim forrásaként szolgál: zsiracil CoA: koleszterinacil transzferáz (ACAT). 50 rósz mellékvese felülÚBZÓból 10 rész marhaBzérumalbuminból (50 mg/ml), 3 rész tesztvegyületból (végsó koncentráció 5,2 /u/ml) és 500 rész pufferből álló elegyet 37 °C-on 30 percig preinkubálunk. Hasonló módon állítunk elő egy kontrollelegyet, kihagyván egy tesztvegyületet és hasonló módon kezeljük. Az inkubáló elegyből kapott lipideket szerves oldószerbe extraháljuk és vékonyrétegkromatográfiásan választjuk el. A koleszterin-észter frakciót szcintillációs számlálóban számláljuk. A hatás kritériuma egy statisztikusan szignifikáns ACAT-enzimgátlás. A teszteredményeket a megfelelő vegyületekkel együtt az I. táblázatban mutatjuk be. I. táblázat Vegyület Gátlás % 1- (2—f enoxipropionil )-4- ( pirazinil)-piperazin 1-f enilacetil-4 - ( 2- kinoxali nil )-30.5-piperazin l“(p~terc-butilbenzoil)-4-(2-pi~ 40.1 razinil)-piperazin l-oktanoil-4-(2-pirazinil)-pipe-39.7 razin l-(2,4-diklórfenilacetil)-4-(2-33.6-rarazinil)-piperazin l-(p-klórfenil)-4-fenilacetil-pi-32.2 perazin l-(3,4-diklórfenilacetil)-4-(2-73.3-pirazinilj-piperazin l-fenil-4-fenilacetil-pipe-38.3 razin l-(p-nitro-fenil-acetil)-4-34.6 (2-pirazinil)-piperazin l-(p-klórfenil)-2-metil-4-fenil-36.4-acetil-piperazin l-pentafluor-benzoil-4-(2-pirazi-88.1 nil)-piperazin N-terc-butil-4-(2-pirazinil)-l-31.2 -piperazin-karboxamid etil-p-[4-(2-pirazinil)-l-pipera-35.4 zin-karboxamido]-benzoát 1- ( 2-tiazolil )-4-o-tolil-acetil-42.2-piperazin l-fenilacetil-4-(2-kinolil)-pipe-32.6 razin l-[5-(p-klórbenzoil)~valeril]-4-89.7-(2-pirazinil)-piperazin l-[2-(p-klórfenoxi)-2-metilpropionil]-4- ( 2-pirazinil) -pipera-47.4 zin 54.1 p-[4-(2-pirazinil)-l-piperazin-karboxamido]-benzoesav 30.6 l-(peutadekafluoroktanoil)-4-(2--pirazinilj-piperazin 39.0 l-(6-metoxi-2-pirazinil)-4-fenilacetil-piperazin 38.1 l~[6-(p-klór fenil )-hexanoil]-4- -( 2-pirazinil)-pipe razin 68.9 A vegyületeket megvizsgáltuk az emlősökben előidézett lipidszint csökkentő hatásuk szempontjából. A vegyületeket orálisan adagoltuk, hozzákeverve a táplálékhoz négy hímnemü Charles River Breedig Laboratories Inc., Wilmington, Massachusettes laboratóriumból származó COBS, CD, SD törzsű hímnemű patkányból álló csoportoknak. 8 patkányból álló kontrollcsoportot tartottunk csak diétán és a tesztcsoportokat diétán tartottuk +0,1 súly% tesztvegyületet kaptak. Öt napi kezelés után a közvetlen enzimes módszerekkel kimutattuk a szérum koleszterint és a triglicerid koncentrációt, Centrifichem* System 400 analizálóval (Union Carbide Co.). A koleszterin koncentrációkat a kombinált koleszterin észteráz - koleszterin oxidáz módszerrel határoztuk meg (Roeschlau és társai, Zeit. Klin. Chem. Kiin, Biochem., 12, 226 [1974]). A triglicerideket a trigliceridek glicerinné és szabad zsírsavakká történő lipázkatalizált hidrolízisének kombinált módszerével határoztuk meg (Bucolo, G. és David H., Clin. Chem., 19, 476 [1973]) és Wahlefeld, A. W., a .Methods of Enzymatic Analysis' 4. kötet, Bergmeyer, II. D., kiadó, Academic Press, New York, NY [1974], 1831-1835 oldalak), és a glicerin enzimes oxidációjának segítségével, amely szines formazán-képzéshez vezet (Stavropoulos, W. S. és Crouch, R. D., Clin. Chem., 20, 7. szám, 857 [1974]). A szérum lipidek változásait a gyógyszerrel nem kezelt kontrollállatok értékeinek csökkenésében fejezzük ki százalékosan. Azokat a vegyületeket tekintjük hatásosnak, amelyek statisztikailag szignifikánsan csökkentik a szterin vagy a triglicerid szintet. A teszteredményeket a II. táblázat tartalmazza. II. táblázat Vegyület Szérimcsökkenés % Szterin Trigliceridek l-(m-klórfenilacetil)-4--(2-pirazinil)-piperazin 46 l-(pentadekafluor-oktanoil-4-(2-pirazinil)-piperazin 47 74 l-(2-fenoxipropionil)-4-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
