191746. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, a vér koleszterin szintjét csökkentő fehérjék és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására
1 191.746 2 szerrel kapott cukor mennyiségét és kitermelését tartalmazza mindegyik eljárás esetéi. A táblázatban az értékek száraz súlyokat jelentenek (mg). 4. TÁBLÁZAT Frakciók Kitermelés Fehérje RNA DNA Cukrok Specifikus aktivitás Csapadék 345 . 265 9 43,6 63 24,3 9,1 Is/.tisztított frakció 285 260,1 11,3 U 12,1 11.7 Hsz. tisztított frakció 274 258,1 3,6 03 113 11 ß Hisz .tisztított frakció 205 5 202,6 nyomnyí nyomnyi 29 169 CRP protein 197 3 197 3 nyomnyi nyomnyi nyomnyi 17,6 A 4. táblázatban jelzett specifikus aktivitás az egyes frakciók koleszterin szint csökkentő relatív aktivitását mutatják közönséges patkányok egységsúlyára számítva, lia a hőkezelt baktériumsejtek koleszterin szint csökkentő hatását 1-nek tekintjük. A hipokoleszterolémiás aktivitás meghatározására alkalmazott kísérleti módszereket a 2. példában ismertetjük. Ezen kívül azt is igazolták , hogy a CRP fehérje az 1. táblázatban felsorolt más baktérium törzsekből is elválasztható) és tisztítható, csak a protein kitermelés változik. 2. példa A CRP fehérje farmakológjai hatása 1. Hipokoleszterolémiás aktivitás (1) 50 mg/testsúly kg-nyi mennyiségnek megfelelő liofilízált CRP fehérjét tartalmazó fiziológiás sóoldatos mintákat készítettünk. Ezekből a mintákból közönséges patkányoknak (18 hónapos hím, átlagos testsúly 246 g, mindegyik csoportban 10 patkány) és közönséges és csíramentes egereknek (18 hónapos hím, átlagos testsúly 30 mg, 10 egér minden csoportban) naponta 1 ini-t adtunk orálisan .Az egereket 8 ■-12 hétig tenyésztettük. Ezután ezeknek az állatoknak az artériás vérét az abdominalis aortából lecsapoltuk és a szérum mintákat oentrifugálással távolítottuk el a teljes vérből. A koleszterint Zurkowski módszerével (Chloskit, Kanto Kagaku KJC, Japán)határoztuk meg Az eredményeket az 5. táblázat összegzi. A táblázatban felsorolt értékek a kezelt csoportok vérében a koleszterin szintjének a kontroll csoport, amely nem kapott CRP proteint, vérének koleszterin szintjéhez viszonyított arányát jelzik. A tetszés szerinti mennyiségben adott élelem százalékos összetételét a 6. táblázat mutatja. 5. TÁBLÁZAT Állat Csökkenési arány (%) Közönséges patkány (12 hetes/kezelés) 25 3 * 0,7 Közönséges egér (8 hetes/kezelés) 335 4 1,1 Csíramentes egér (8 hetes/kezelés) 21,7 ±09 6. TÁBLÁZAT összetétel Súly % Kazein 20 Szójaolaj 10 Búzakeményítő 61 Ásványi anyagok 4 Vita min keverék 2 Porított szűrőpapír 3 2. Hipokoleszterolémiás aktivitás (2) A fent említett mintákat naponta 1 ml dózisban adagoltuk közönséges patkányoknak (18 hetes, b« átlagos testsúly 238 g, minden csoportban 15 pat° kány) és közönséges és csíramentes egereknek (18 hetes, átlagos testsúly 31 g, 10 egér minden csoportban) 12 héten keresztül. A vérkoleszterint a fentiekben említett módszer szerint határoztuk meg. Az eredményeket a 7, táblázat tartalmazza. 56 A „koleszterinnel terhelt" és a ,/ruktózzal terhelt” kifejezés a táblázatban azt jelenti, hogy a fenti táplálékhoz 1% koleszterint adtunk, illetve búzakeményítőt teljes egészében fruktózzal helyettesítettük. A táblázatban található értékek a nem kezelt csoporthoz viszonyított koleszterin szint csőkké- 60 nést jelentik %-ban kifejezve. 6
