191746. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, a vér koleszterin szintjét csökkentő fehérjék és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására
1 2 7. TÁBLÁZAT Állatok Csökkenési szint % Csíramentes egerek*, 35,4 ± 1,3 Közönséges egerek* , 389 ±0,7 Közönséges patkány ok Közönséges patkányok*^ 49/2 ±1,1 41 3 ± 1,3 a1 = Koleszterinnel terhelt étrend ** =’ Fruktózzal terhelt étrend 3. Hipokoleszteroléiniás aktivitás (3) 10 mg/ml CRP fehérjét tartalmazó fiziológiás sóoldat minta 1 ml-ét adtuk naponta 2 héten keresztül hiperkoleszterolémiás patkányoknak (18 hetes hím, átlagos testsúly 250 g, 5 patkány minden csoportban), melyeket „koleszterinnel terhelt’’eledellel etettünk. A vér koleszterin szintjét a fentemlített módszer szerint határoztuk meg. Az eredményeket a 8, táblázat tartalmazza. A táblázatban található értékek a nem kezelt csoporthoz viszonyított koleszterin szint csökkenést jelentik százalékban kifejezve. 8. TÁBLÁZAT Állat Csökkenési arány % Kezelt 49,9 Kontroll 0 4.Dózisválasz Fiziológiás sóoldatban 0,1 mg — 20 mg/inl CRP fehérjét oldottunk, és ennek 1 ml-ével kezeltük naponta a kísérleti közönséges patkányokat (6 hetes hím, átlagos testsúly 216 g, 5 patkány egy csoportban) 4 héten keresztül. A vérkoleszterint a fentiekben ismertetett módszerrel határoztuk meg (a kontroll csoportnak nem adtunk CRP fehérjét). Az eredményeket a 9. táblázat mutatja. 5 9. TÁBLÁZAT Dózis (mg/patkány) Csökkenési arány (átlagos %) Kontroll 0,1 9ß ± 0,7 1 14,3 ±.1,2 10 47 9 ±1,1 20 51,1 ±09 5. Akut toxidtás 1, 10 és 100 mg CRP fehérjét tartalmazó fiziológiás sóoldat mintákkal (0,5 ml/egér) intraperitoneálisan kezeltünk ICR egereket (6 hetes hím, átlagos testsúly 31,4 ± 0,6 g, 10 egér minden csoportban). Az egerek thanatobiológiás megfigyelését 14 napon keresztül folytattuk. A kontroll anyag fiziológiás sóoldat volt. Az LDso-ct a Behrens-Karber módszerrel határoztuk meg, és ez több volt, mint 802 mg/testsúly kg. Az 4 anyag orális kezelés esetár lényegében nem volt toxik js. 6. Gyógyszerkészítmények (1) 50 mg tisztított CRP fehérjét 250 mg tisztított keményítőporral homogenizáltunk, ezután orális kezelésre alkalmas tablettákat formáztunk belőlük. Ez a trbletta megfelel annak, mint ha 10l° hőkezelt sejt/ /testsúly kg-ma) kezelnénk egy 50 kg-os felnőttet. (2) A CRP fehérje egységesen összekeverhető hígító bázisokkal, mint például a kalcium-karbon át, lakíóz stb. síkosítóanyagokkal, mint sztearínsav, talkum : tb. és más adalékanyagokkal, és tabletták készíthetők orális kezelés céljára. Ez a tabletta megfelel 0,1- -100 mg/testsúly kg-os kezelés céljára, (3) 900 mg CRP fehérjét 30 ml desztillált vízben szuszperuiáltunk és oldottunk, megédesítettünk és szirupot készítettünk belőle. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás új, az emlősök vérének koleszterin-szintjét csökkentő fehérje,mely a következő tulajdonságokkal rendelkezik: a) gélen való szűrés után a mólsúlya: 30.000 ± ± 7.000 b) izoelektromos pontja: 79 ± 03 c) aminosav-összetétele (mól %): Glicin 25 3 Alanin 1098 Glutamin 10,34 Aszparagin 830 Lizin 6,39 Leudn 5 38 Valin 5,41 Izoleudn 5,18 Treonin 433 Tírozin 4,19 Szerin 3,46 Prolin 2,62 Ar ginin 2,60 Fenil alanin 231 Metionm 136 Hiszti din 130 Osztóin 0,16 d) az elektroforézis eredménye: éles sáv az elektroforézishez használt poliakrilamíd gél anódoe oldalán, előállítására, azzal jellemezve, hogy egy Streptococcus törzsbe tartozó S. faedum, S.faecalis, S. avium, S. bovis, S. Salivarius, S. durans, S. mitis, S. equinus mikroorganizmust megfelelő tápközegben tenyésztünk, majd a vér-koleszterin szín tjét csökkentő aktív fehérjét a baktérium sejtek szétzúzása után kinyerjük a közegből. 2. Az 1.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként az alábbi mikroorganizmusok közül legalább egyet alkalmazunk: S. faedum FERM BP-296 S. faecalis FERM BP-297 S. avium FERM BP-198 S. salivarius FERM BP-299 S. durans FERM BP-300 S, mitis FERM BP-301 S equinus FERM BP-302 3. Eljárás a vér koleszterin szintjét csökkentő vagy atherosclerosis ellenes gyógyszerkészítmény előállítására , azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított fehéijét gyógyászatilag alkalmas inert, szilárd vagy folyékony hordozóval összekeverjük és gyógyászati készítménnyé alakítjuk. 191.746- 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 1 db rajz 7
