191681. lajstromszámú szabadalom • Eljárás piridil-N-oxid-karbonsav-észterek és hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 2 191 681 a találmány szerinti eljárással előállított vegyilletek legalább egyikét hatásos dózisban tartalmazzák a szokásos hordozó vagy hígítóanyagokkal együttesen. Hatásossági vizsgálatok A hatástani vizsgálatokat nőstény CFY patkányokon (50-60 g) (Hacking and Churchill Ltd) végezzük. Az állatok súlyát megérkezésükkor megmérjük, majd dróthálós kalitkába helyezzük őket, ahol négy napon át akklimatizálódni hagyjuk őket. Az állatokat szobahőmérsékleten 23 ± 2°C hőmérsékleten tartjuk. A hőmérsékletet és a levegő relatív nedvességtartalmát regisztráljuk. Mesterséges világítással 12 órás világos (reggel 7 órától délután 7 óráig) és 12 órás sötét periódust tartunk fenn. A'vizsgálat alatt az állatok ad libitum kapnak vizet. A négynapos akklimatizálódási periódus után az állatokat poralakú kis zsírtartalmú diétás táppal (Spratt s Laboratory Animal Diet No. 2) ad libitum etetjük. A következő 14 napon át az állatokat ad libitum a fenti táppal és 2 súly%-ban hozzáadagolt koleszterollal és 1 súly%-ban hozzáadagolt kolsawal etetjük. Ezalatt a periódus alatt az egyedek tápanyagfelvételét heti három alkalommal regisztráljuk. A 14. napon reggel 6.00 és 7.30 óra között az állatoktól éteres érzéstelenítés mellett a retro-orbitális plcxustól vérmintát veszünk. Minden vérmintában meghatározzuk az összes szérum koleszterol, a HDL koleszterol, a /^lipoprotein és a triglicerid koncentrációt. S Az összes szérum koleszterol szint alapján az állatokat kezelési csoportokba szétosztjuk, oly módon, hogy minden egyes csoport összes koleszterol szintjének eloszlása hasonló legyen és a kezdeti átlagos koleszterol szint megközelítőleg minden csoportban egyenlő legyen. ’u A következő 14 napon keresztül a kontroll állatok kivételével az állatokat hiperkoleszterinémiás táplálkon tartjuk, amelyhez megfelelő koncentrációban (0,1%) vizsgálati anyagot adagolunk. A 14 napos kezelés minden napján regisztráljuk az egyedek tápanyagfelvételét és hetenként egyszer az állatok testsúlyát is. A vizsgálat utolsó napján a kezelés előtti 14. napon végzett vérvételhez hasonlóan az állatoktól vérmintát veszünk. A vérmintákban meghatározzuk az összes szérum koleszterol, a HDL koleszterol, a (3-lipoprotein és a triglicerid szintet. 20 Az állatok elpusztítása után májukat eltávolítjuk és azok tömeget meghatározzuk. A vizsgálati eredményeket az 1. táblázatban foglaljuk össze. A kontroll állatok adataival összehasonlítva a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek alkalmazásával, minden paraméterben pozitív szigni-25 Pikáns változás tapasztalható. A vizsgálati állatok májának tömege változatlan maradt. 1. táblázat A találmány szerinti vegyületek hatásossága Vegyület Dózis a tápanyag %-ban összes koleszterol mg/100 ml HDL koleszterol mg/100 ml Triglicerid mg/100 ml ß-lipoprotein optikai sűrűség x 1000 Májtömeg Kontroll — 235,6 22,5 116,3 341,3 15,3 1 0,1 184,8 28,5 121,5 325,8 16,3 2 0,1 191,5 26,3 112,1 318,5 16,0 3 0,1 145,0 28,3 108,1 244,4 15,0 4 0,1 170,1 25,9 113,7 307,2 15,2 5 0,1 150,6 27,4 109,2 266,3 15,6 6 0,1 159,1 28,1 105,9 254,8 15,1 7 0,1 155,1 27,2 109,8 260,3 15,4 Általános eljárás piridil-N-oxid-karbonsav-észterek előállítására 50-100 ml diklór-etánban feloldunk 20 mmól megfelelő nikotinsav-észtert, az oldatot jéggel hűtjük és mágneses keverő alkalmazásával kevertetjük, majd körülbelül 15 perc alatt 4,22 g (22 mmól) 90%-os 3-klór-perbenzoesavat adagolunk hozzá. A reakcióelegyet további 30 percen keresztül 9°C hőmérsékleten kevertetjük. Az egyes reakciók körülményeit a 2. táblázatban foglaljuk össze. A vékonyrétegkromatográfiás ellenőrző vizsgálatot Si02 rétegen CHCl3/MeOH 9 : 1 kifejlesztőrendszerrel végezzük. A reakciót —10-60°C hőmérsékleten végezzük. A feldolgozáshoz a reakcióelegyet körülbelül 250 ml diklór-metánnal hígítjuk. A szerves fázist kétszer 100 ml telített Na2SÓ3 oldattal, majd háromszor 100 ml telített NaHC03 oldattal és ezután kétszer 100 ml telített NaCl oldattál mossuk. A szerves fázist Na2S04-on szárítjuk, az oldószert vákuum alkalmazásával eltávolítjuk, a maradékot aktívszén alkalmazásával kívánt esetben átkristályosítjuk. A fenti perbenzoesav helyett alkalmazhatunk más peroxi-savakat vagy jégecetes hidrogénperoxldot. A következő vegyületeket állítjuk elő a fent ismertetett eljárás szerint: Példák száma: gg 1. 2-ciklohexil-fenil-nikotinát-N-oxid 2. 4-ciklohexil-fenil-nikotinát-N-oxid 3. 2-terc-butil-4-ciklohexil-fenil-nikotinát-N-oxid 4. 4-íciklohexil-acetil)-fenil-nikotinát-N-oxid 5. 4-<l-adamantil)-fenil-nikotinát-N-oxid 6. 1 -[2-(4-klór-fenoxi)-2-metiI-propanoil-oxi]-2- 60 -(nikotinoil-oxi)-etán-N-oxia 3
