191473. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-lipoproteinek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 191 473 2 A találmány tárgya új eljárás olyan a-lipoproteinek előállítására, melyek a vitiligo kezelésére alkalmas készítmények hatóanyagaként felhasználhatók, továbbá eljárás a készítmények előállítására. A szóbanforgó készítmény olyan bőrgyógyászati megbetegedés gyógyítására használható, amelyet a melanin hiány okoz az emberi test különböző részein. Jelen találmányunkhoz leghasonlóbb prototípusok azok a különböző növényi eredetű vagy félszintetikus vegyületek, amelyeket „pszoraléneknek” nevezünk, és amelyek szájon át vagy a bőrön keresztül alkalmazva felhalmozódnak a bőrpigmentet termelő sejtekben, az úgynevezett melanoforákban, és az ultraibolya sugárzásból energiát elnyelve bőrpigment termelést hozhatnak létre. E vegyületek azonban toxikusak: a bőrön keresztül alkalmazva bőrgyulladást és bőrelhalást, szájon át történő adás esetén pedig emésztőszervi megbetegedéseket okozhatnak. Arnold, M. J. Jr. „Psoralens and Suntan” („Pszoralének és a lesülés”); Hawaii Med. J. 1957, 16, 391. Becker, S. W. Jr. „Methods of increasing the skin pigmentations” („Módszerek a bőr pigmentációjának fokozására”); J. Soc. Cosmetic. Chem. 1958, 9, 80. Fitzpatric, T. B. „Pigmentary Diseases” („Pigment betegségek”); Current Therapy 1958, 514. Becker, S. W. Jr. „Effects of 8-Methoxy Psoralen and ultraviolet light in human skin” („A 8-metoxipszoralén és az ultraibolya fény hatása az emberi bőrre”); Science 1958, 127, 878. Sidi, E., Planat, P. „Practical considerations on actual treatment of vitiligo” („Gyakorlati szempontok a vitiligo korszerű kezeléséhez”); Bevue of Medicine 1968, 23 Dec. A pszoralének a vitiligo vagy leukoderma kezelésében mostanáig a legjobb gyógymódot jelentették, azonban számtalan hátrányuk is van. Ilyenek például: igen költségesek; a kezelés abbahagyásakor hatásuk lassúvá és reverzibilissé válik; alkalmazásuk is nehézségekkel jár, mivel az ultraibolya sugárzás expozíciós idejét fokozatosan keli növelni ; súlyos toxikus reakciók is felléphetnek, például égések keletkezhetnek a bőrön keresztül történő alkalmazáskor, szájon át történő adás esetén pedig májelégtelenség, emésztőszervi és idegrendszeri betegségek léphetnek fel. A találmány szerinti készítmény stimulálja a bőr melanin szintézisét, és a melanint termelő sejtek szaporodását, amint ezt a gyógyszertani kísérletek bizonyítják. Toxikológiai, teratológiai és klinikai kísérletek szintén azt igazolják, hogy nem lépnek fel súlyos másodlagos reakciók. A találmány szerinti készítmény kinyerése és használata könnyű, a beteg embernek csak igen rövid időre kell magát ultraibolya sugárzásnak kitennie, a hatás igen gyorsan, 15-20 nappal a kezelés megkezdése után jelentkezik, a keletkező bőrszín azonos a beteg normális bőrszínével, és az egészséges bőr színének intenzitása nem fokozódik, mint a pszoralének használata esetén. A találmány szerinti készítményt emberi szövetből nyerjük, és a sem immunológia reakciók, sem a korral, nemmel és fajjal kapcsolatos ellenjavallatok nincsenek. A találmány célja a vitiligo gyógyítására alkalmas készítmény előállítása. Ez a betegség egyike a legrégebben ismert emberi megbetegedéseknek. Körülbelül a világ népességének l %-át érinti, korra, nemre, fajra való tekintet nélkül. Kóroktana ismeretlen, és nincs határozott terápiája sem. Ezt a betegséget nagy idegi megterhelésnek (Stressznek) kitett betegek bőrének fokozatos elszíntelenedése jellemzi, és a tünetek fellépése (fokozott pigmentációjú gyűrűvel körülvett fehér bőrfelületek az arcon, törzsön vagy más területeken) kedvezőtlenül hat a betegek lelkiállapotára és szociális magatartására. A találmány értelmében fenti célt úgy érjük el, hogy az emberi méhlepény cotyledokat etilalkohollal és benzoesavval kezeljük, majd Sephadex gélen s2Űrjük, majd az így nyert terméket, mely elektroföretikus vándorlás során a-lipoproteinnek bizonyult lipoproteint tartalmaz, liofilizáljuk. A termék etilalkoholban való oldásával állítjuk elő a gyógyszerkészítményt. 1. példa 1 kg méhiepény-cotyledot 7-10 napos fagyasztás után porrá törtünk, majd 95 %-os etilalkoholban áztattuk, egyenlő részekre osztva (súly/térfogat). Ezután meghatároztuk a felülúszó pigment-képző aktivitását, ami a tengerimalac mellbimbó bőrén történt kezelés után 20-50 napig pozitív volt. Ezután a fenti, pigment-képző faktort tartalmazó kivonat 200 ml-éhez 10 ml 95 %-os, benzoesavval telített etilalkoholt adtunk, injekciós tű segítségével. Benzoesav/etilalkohol telített oldatának készítése úgy történt, hogy 5—12 ml 95 %-os etilalkoholhoz 2-8 g benzoesavat adtunk. Ezután a keveréket 10-15 percig ráztuk, majd Buchner tölcsérrel, 2—5-ös Whatman szűrőpapíron szűrtük. Ezt követően a csapadékot 200-500 ml, benzoesavval telített vízzel mostuk. Víz/benzoesav telített oldatát úgy készítettük, hogy 300- 1000 ml desztillált vízhez 2- 10 g benzoesavat adtunk. Ezután a csapadékot spatula segítségével eltávolítottuk a szűrőpapírról, majd 100-500 ml tiszta vagy 30 %-os acetont adtunk hozzá. Ezt követően 1500-as fordulatszámmal 10-30 percig centrifugáltuk, és félretettük a felülúszót. A csapadékot ezután 2—10-szer újra átmossuk 100-500 ml acetonnal, majd vákuumban és környezeti hőmérsékleten szárítottuk és a készítményt 95 %-os alkoholban feloldottuk. A fenti, biológiai aktivitású készítmény 5 ml-ét 5x 10-től 5* 10~6 mólos nátriumfoszfát puffer segítségével 4- 8-as pH-ra beállított Spephadex g-30-on vagy g-100-on szűrtük, és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
