191129. lajstromszámú szabadalom • Eljárás riboflavin előállítására
3 191 129 4 Táblázat A VNIIGenetika 304jpM/45 törzs morfológiai és tenyészeti jellemzői No. A mikroszkóppal látható alaktani sajátságok 2 — 3 p hosszúságú, spóraképző Gram-pozitív bacillus 1 2 3 Alaktani sajátságok különböző táptalajokon 1 Hús - pepton - agar 28 - 37 °C hőmérsékleten, a tenyésztés 1 - 2. napján csillagszerű, töredezett szélű, 3-4 mm átmérőjű kolóniákat alkot, amelyek felülete sima, fénylő, sárga színű. 2 Hús - pepton - tápleves Oltás után a szaporodás mérsékelt, főként a táptalaj felületén megy végbe. Rázás nélküli szaporodás során a felületen film képződik. 3 Spicizen-féle minimál-táptalaj glukózzal (összetétel: 0,2 tömeg % (NH4)2S04, 0,6 tömeg % KHjP04, 1,4 tömeg% K2HP04 • 3 H20, 0,1 tömeg % Na-citrát, 0,01 tömeg% MgS04, 0,5 tömegé glükóz, ad 100 tömeg % desztillált víz; a MgS04-t és a glükózt sterilizálás után adjuk a tápközeghez) A tenyésztés 2. napján halványsárga, 2 — 3 mm átmérőjű kolóniákat képez, amelyek ibolyántúli fényben sárgán fluoreszkálnak: a kolóniák kerek alakúak, fénylők. 4 Fiziológiai és biokémiai ismertetőjelek 28-42 ”C hőmérsékleten szaporodik, az optimum 37 °C-on van, a pH optimuma 5,0-9,0. Szénforrások : jól asszimilálja a glukózt, szaccharózt, keményítőt. Nitrogénforrások: jól asszimilálja az ammóniumsókat, karbamidot, nitrátokat. A zselatint elfolyósítja. A riboflavin előállítására alkalmas, találmány szerinti eljárást a következőképpen valósítjuk meg. 24 órás, hús — pepton- ferdeagaron vagy hús-pepton - agaron 20 pg/ml eritromicin-koncentrációval tenyésztett kultúrából lombikban olyan kultúraközeget oltunk be, amely melaszt vagy szaccharózt, szárított takarmányélesztő-biomasszát és ásványi sókat tartalmaz. Az inokulumot 17-24 órán át levegőztetés közben 37 °C hőmérsékleten tenyésztjük, majd 10 tömeg % mennyiségben a fő-fermentációs közegbe visszük. A fermentációt 37-41 “C hőmérsékleten levegőztetés és erélyes keverés közben fermentorban végezzük. A fermentációs közeg szénforrásként glukózt vagy szaccharózt vagy melaszt vagy keményítőt, ásványi nitrogén forrásaként például karbamidot vagy ammóniumsókat vagy nitrátokat, s ezen kívül ásványi sókat tartalmaz. Szaporodási faktorok (növekvést, szaporodást elősegítő anyagok) forrásaként a tápközegben takarmányélesztő vagy szárított élesztő szárított biomasszáját, vagy élesztőkivonatot, peptont, kazein-hidrolizátumot, vagy kukoricaduzzasztóiét alkalmazhatunk. A fermentációt kétféle eljárással hajthatjuk végre. Az első kiviteli mód szerint az összes szükséges szénforrást egyszerre visszük a tápközegbe; a másik kiviteli mód szerint a fermentációs közeg előbb csak 5 — 7 tömeg % szénforrást tartalmaz, és a fennmaradó 3-5 tömeg%-ot 12- 18 óra elmúltával adagoljuk hozzá, amikor a tenyészet a stacionárius növekvési fázist elérte. A B. subtilis VNIIGenetika 304/pMX45 törzs 40-48 órás tenyésztése után a kultúrafolyadékban a riboflavin koncentrációja 40 1600 - 4500 mg/literre dúsul. A végterméket ismert módon, az így kapott kultúrafolyadék bepárlása útján a biomasszával együtt különítjük el. így egy riboflavin-koncentrátumhoz jutunk. A riboflavint ismert technológiai eljárás segítsé- 45 gével tiszta formában, kristályos anyagként is elkülöníthetjük. A találmány szerinti eljárás lehetővé teszi, hogy a riboflavin hozamát az ismert eljárással összehasonlítva 4-8-szorosára növeljük, és az egyszerű, könnyen hozzáférhető tápközeg alkalmazása követ- 50 kéziében az előállítási eljárás technológiáját egyszerűsítjük. A találmány részletesebb ismertetése végett az alábbiakban példákat adunk meg a riboflavin előállítására. 55 /. példa 24 órás, hús - pepton - ferdeagaron tenyésztett Ba- 60 cillus subtilis VNIIGenetika 304/pMX45 tenyészetet oltókacs segítségével az alábbi (tömeg%-ban megadott) összetételű, cseppfolyós inokulációs közegre oltunk: 65 I 3
