190919. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírusok szaporitására alkalmas sejttenyészetek előállítására
5 190.919 6 Vizsgálatainkban a vaccinia-vírusnak a CEO sejttenyészetekben való jelenlétét elektronmikroszkóppal is igazoltuk. Vizsgáltuk továbbá a vaccinia-vírus hatását CEO sejttenyészetek enzimaktivitásaira is. Vírussal oltott, 5 valamint oltatlan kontrolltenyészetekben a laktátdehidrogenáz (LDH), a malát-dehidrogenáz (MDH), a gamma-glutamin-transzpeptidáz (GGTP), a gamma-glutamin-peptidáz (GGP), a leucin-amino-peptidáz (LAP) és az izocitromsav-dehidrogenáz (ICDH) enzimek aktivitásainak változását mértük. A vírus sejtkárosító hatása miatt az enzimek a sejtekből kiszabadulnak. A 24, 48, 72 és 96 órára vett mintákban az enzimaktivitások emelkedő tendenciát mutatnak, és a vírussal oltott tenyészetek a kontrollokhoz viszonyítva számottevően magasabb enzimaktivitási értékekkel rendelkeznek. Az eredményeket a 2. táblázatban tüntettük fel. Vaccinia-vírus (Poxvirus Officinale) hatása CEO sejttenyészetek enzimaktivitásaira LDH /<mól NADH ml/ó MDH /rmól NADH ml/ó ICDH /tmól HADH ml/ó LAP pmó\ pna ml/24 ó Savanyú f. /tmól pnF Alkalikus f. ml/24 ó <o CEO K tenyészet 1,915 0,760 0,025 0,460 0,410 0,094 J-R Tápközeg- Z 23 kontroll 0,270 0,120 0,000 0,240 0,000 0,035 Vírussal fertőzött 0,440 0,220 0,000 0,175 0,000 0,043 '2 0h Nem 2 fertőzött 0,200 0,133 0,000 0,165 0,000 0,038 g .2 Tápközeg(ju '2 kontroll 0,210 0,270 0,000 0,140 0,000 0,065 Vírussal fertőzött 1,013 0,300 0,013 0,233 0,100 0,053 „ 24” Nem ^ fertőzött 0,560 0,400 0,005 0,210 0,160 0,055 Tápközegkontroll 0,100 0,320 0,000 0,130 0,140 0,048 Vírussal fertőzött 3,970 1,830 0,097 0,336 0,123 0,006 Z 48h Nem fertőzött 0,870 0,466 0,013 0,240 0,163 0,006 g Tápközeg^ kontroll 0,210 0,160 0,005 0,150 0,100 0,007 Vírussal fertőzött 8,030 1,493 0,129 0,463 0,216 0,008 2 72h Nem g fertőzött 1,210 0,360 0,007 0,310 0,163 0,000 Tápközegkontroll 0,200 0,040 0,000 0,140 0,150 0,000 Vírussal ,0 fertőzött 7,410 2,986 0,131 0,423 0,144 0,004 S 96h Nem c fertőzött 1,430 1,293 0,027 0,285 0,170 0,019 5 Tápközeg^ kontroll 0,000 0,350 0,000 0,130 0,125 0,000 A GGTP és a GGP enzimek értékei a mérési határ alatt voltak! Megjegyzés: NADH: nikotinsavamid-adenin-dinukleotid, redukált pna: paranitro-anilin pnF: paranitro-fenol 4. példa A találmány szerinti eljárással készült sejttenyészeteket csirkeembrió chorioallantois membránján szaporított baromfihimlő tyúktípusú (C)vírustörzszsel oltottunk. A tenyészetek a vírusfelvitel 4. napján CP hatást mutattak, mely az 5-6. napra még kifejezettebbé vált. A tenyészet sejtjei eleinte lekerekedtek, majd a tenyészet kezdett felszakadozni. A víru-4
