190787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 9-(szubsztituált 4-hidroxi-butil)-guanin-származékok előállítására
1 _ 190 787 2 Sztearinsav 2,0 g Paraffinolaj 2,0 g Propilénglikol 2,0 g Glicerin 1,5 g Metil-parahidroxibenzoát Propil-parahidroxibenzoát N átriumhidroxid 0,06 g 0,03 g 0,002 g Sósav, 2 M pH 8-ig (vizes fázis) Desztillált vízzel 100 g-ra kiegészítve 37. példa Zelé Hatóanyag 3,0 g Methocel® 2,45 g Glicérin 10,0 g Tween® 0,10 g Metil-parahidroxibenzoát 0,06 g Propil-parahidroxibenzoát 0,03 g Nátriumhidroxid Sósav, 2M pH 8-ig 0,002 g Desztillált vízzel 100 g-ra kiegészítve 38. példa Tabletták /• Minden tabletta a következő anyagokat tartalmazza: Hatóanyag ' 100,0 mg Keményítő 60,0 mg Tejcukor 190,0 mg Polivinilpirrolidon 5,0 mg Magnéziűmsztearát 5,0 mg 360,0 mg Biológiai vizsgálatok A találmány szerinti vegyületeknek a herpesz vírusra gyakorolt gátló hatását az alábbiakban ismertetett módszerekkel vizsgáltuk. A vegyületeknek a gazdasejt működésére kifejtett celluláris toxicitását is vizsgáltuk. A következőkben a 9-(3,4-dihidroxi-butil)guanin bázist VIS 707, a 9-(2,4-dihidroxi-butil)guanin bázist VIS 715 és a 9-(3-fluor-4-hidroxibutil)-guanin bázist VIS 912 jellel jelöljük. I. Vírus-szaporodás gátlása sejttenyészetben . A herpesz-vírus gátlását a VIS 707, VIS 715 és VIS 912 jelű anyagokkal foltcsökkenés formájában mértük a kővetkező eljárás szerint. A. 1 típusú herpes simplex folt gátlása VIS 707, VIS 715 és VIS 912 jelű anyagokkal. A foltcsökkenéses vizsgálatot, mely az 1 tipusú herpes simplex meghatározására alkalmas, Verő sejteken (Green Monkey Kidney) Ejercito és munkatársai leírása alapján (J. Gen. Virol. 1968, 2, 357) végeztük. 5 cm-es petricsészéken monorétegeket alkalmaztunk és a vírus-adszorpció után a vizsgálandó VIS 707, VIS 715 és VIS 912 vegyületeket adtuk a közeghez. Az eredmények az 1. táblázatban láthatók. I. táblázai VIS 707, VIS 715 és VIS 912 anyagok gátló hatása 1 típusú herpes simplex foltra Verő sejt monorétegeken Koncentráció (pM) Vegyület Gátlás (%) 1 VIS 707 65 5 VIS 707 >90 100 VIS 715 90 10 VIS 912 30 50 VIS 912 85 100 VIS 912 >90 B. VIS 707 és VIS 912 anyagok gátló hatása 2 típusú herpes simplex foltra. A 2 típusú herpes simplex foltcsökkenéses meghatározását ugyanúgy végeztük, mint az A) kísérletben. Az eredmények a 2. táblázatban láthatók. 2. táblázat VIS 707 és VIS 912 gátló hatása betegből izolált 2 típusú herpes simplex foltra Verő sejt monorétegeken Koncentráció (pM) Vegyület Gátlás (%) 10 VIS 707 85 20 VIS 707 >99 100 VIS 707 100 100 VIS 912 80 II. Celluláris toxicitás A VIS 707, VIS 715 és VIS 912 jelű anyagok celluláris toxicitását vizsgáltuk, mint az a 3. táblázatban látható. A Stenberg (Biochemical Pharmacology, 1980, 30, 1005-1008) által leirt módszert alkalmaztuk. Látható, hogy a VIS 707 nem befolyásolja szignifikánsan a sejtnövekedést 100 pM koncentrációban, ugyanakkor azonban sokkal alacsonyabb, 5 pM-os koncentrációban, a herpesz vírus szaporodását 90-nél nagyobb százalékban gátolja. (ld. : az 1. táblázatot). 3. táblázat A VIS 707, VIS 715 és VIS 912 celluláris toxicitása a sejtnövekedés százalékos csökkenésében kifejezve 48 órás inkubálás után Koncentráció (UM) Vegyület A Vetro sejtek növekedésének %-os csökkenése, a sejtek számának meghatározása alapján 100 VIS 707 10 100 VIS 715 10 100 VIS 912 30 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
