190774. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyhayású éter származékok előállítására
1 190 774 2 Az (la) jelű (8. oldal) vegyületet feloldjuk izotóniás sóoldatban, amely 25 mmól nátrium-hidrogénkarbonátot tartalmaz. Friss, heparinizált normál emberi vér 0,9 ml-éhez hozzáadunk 0,1 ml-t az eíőre elkészített oldatokból úgy, hogy a vizsgálandó vegyület töménysége az egyes mintákban 0 (kontroll) 0,3, 1,0 és 3,0 mmól legyen. Az elegyet 37 °C-on 30 percig inkubáijuk, majd mindegyiknek felvesszük az oxigén-disszociációs görbéjét. A méréshez teljes vér-spektrofotométert használunk (kereskedelmi neve Hem-O-Scan). A disszociációs görbék balratolódása az egyes dózisok esetében az alábbi volt. A p50 azt az oxigénnyomást jelzi, amelynél a haemoglobin 50%-a van oxigénezett állapotban. (la) jelű vegyület (mmól) p50 átlagértéke (Hgmm-ben) 0 26,0 0,3 25,5 1,0 21,5 3,0 9,0 B) A patkányvér disszociációs görbéjére való hatás in vitro Éteres altatás alatt felnőtt albínó patkányból vért vettünk az abdominális aortából. 6,5 ml vért elkevertünk 1,5 ml sav-citrát-dextróz antikoagulánssal. A keverékből 2 ml-es mintákat használtunk a kontrolihoz és az (la) jelű vegyület vizsgálatához. A vérplazma 2 ml-ében annyi vizsgálandó vegyületet oldottunk, hogy annak koncentrációja 3 mmól volt. A mintákat 37 °C-on 30 percig inkubáltuk és felvettük az oxigén-disszociációs görbéket, az A) módszer szerint. A vizsgálandó vegyülettel felvett görbe jelentősen balra tolódott a kontroli-mintához képest. p50 átlagértéke (la) vegyület (mmól) (Hgmm-ben) Ö 44^5 3,0 8,2 C) Patkányvér disszociációs görbéjére gyakorolt hatás in vivo vizsgálat esetében 100-150 g súlyú nőstény patkányokat 24 órára helyhez kötöttük úgy, hogy vizet tetszés szerint kaphattak. Az (la) jelű vegyületet feloldottuk izotóniás sóoldatban, amely 25 mmól nátrium-hidrogénkarbonátot tartalmazott, és az oldatot két patkánynak orálisan (500 mg/kg) és másik két patkánynak intravénásán (100 mg/kg) beadtuk. A kontroll állatok csupán a megfelelő hordozót kapták, ellenőrzés képpen. Egy óra múlva minden állattól vért vettünk kloroformos altatás közben az abdominális aortából. Mindegyik vérből 2,5 ml-t dinátrium-edetát antikoagulánssal összekevertük, és felvettük az oxigén-disszociációs görbéket. A görbék jelentős balra-tolódását figyelhetjük meg minden csoportban, a kontrolihoz viszonyítva. p52 átlagértéke Kezelés (Hgmm-ben) hordozó orálisan 42,75 *500 mg/kg orálisan 10,25 hordozó intravénásán 43,37 *100 mg/kg intravénásán 22,37 * (la) jelű vegyület A mellékelt 1. ábra mutatja, hogy az intravénás adagolás hatására a kapott görbét, a megfelelő kontroll görbével együtt. Az abszcisszán az oxigénnyomást, az ordinátán az ozikemoglobin mennyiségét tüntettük fel. Az (la) jelölés az (la) vegyületet jelenti. Ha a vegyületet orálisan adagoltuk, az alőbbihez teljesen hasonló görbét kaptunk. D.F.) Homozigóta embertől származó sarlósejtes vér oxigén-disszociációjára gyakorolt hatás vizsgálata in vitro kísérletben 4 térfogatnyi sarlósejtes emberi vért 1 térfogatrész sav-citrát-dextrózzal összekevertünk, és az elegyből egy térfogatrészt összehasonlító mintának félretettünk. A maradék plazmában (la) jelű vegyületet oldottunk fel úgy, hogy annak végső koncentrációja 3 mmól legyen. Mind a vizsgálati, mind pedig az összehasonlító mintát 45 percig 37 °C-on inkubáltuk, mielőtt az oxigén-disszociációs görbét felvettük volna, az A) pontban leírt módon. Három ;gyén vérével elvégzett mérések eredményének átlagát az alábbiakban adjuk meg. A vizsgálati mintákon erős balratolódás figyelhető meg. p50 átlagértéke (la) vegyület (mmól) (Hgmm) _ ■ 5Ï 3,0 10 E) Sarlósodásra való hajlam vizsgálata in vitro kísérletekben, homozigóta ember sarlósejtes vérével. Homozigóta ember sarlósejtes vérét in vitro dezoxigéneztük körülbelül 28 Hgmm oxigén-nyomás mellett. A vörös vérsejteknek körülbelül 50%-a sarlósodon ilyen körülmények mellett. Ezután (la) jelű vegyületet adtunk hozzá úgy, hogy annak koncentrációja 3 mmól legyen Az ezt követő 60 perc alatt a sarlósodott sejtek aránya körülbelül 3%-ra esett vissza. Az ellenőrzött vizsgálatnál ugyanezen idő alatt a sarlósodott sejtek aránya közel 70%-ra nőtt. F) Toxicitás vizsgálatok Az (la) jelű vegyületet nátrium-hidrogénkarbonát és konyhasó oldatában orálisan adagolva egereknél 1,0 g/kg mennyiségnél találtuk az akut LDS0 értéket. G) Kardiovaszkuláris hatások altatott patkányoknál A vizsgálathoz 250-350 g súlyú hím Wistar patkányokat használtunk. Az altatást oxigénnel 3-5 %ra hígított halothannal indítottuk és chloralose (60 mg/kg i.v.) és pentobarbitom (20 mg/kg i.v.) elegyével tartottuk fenn. A vegyszer adagolása céljából a femorális vénát, az artériás vérnyomás mérése céljából pedig az ispelaterális femorális artériát kan-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
