190730. lajstromszámú szabadalom • Eljárás spergualinszármazékok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 190 730 2 4. táblázat A találmány szerinti vegyületek Bacillus subtilisre gyakorolt növekedésgátló hatása Vegyület MIC (Példa száma) (gg/ml) 1. 6,25 2. 12,5 3. • 25 4. 12,5 5. 25,0 6. 25,0 7. 25,0 8. >100 9. >100 10. >100 11. >100 12. 12,5 13. >100 14. 50,0 15. 100 16. 200 17. 6,25 18. 100 3. A találmány szerinti vegyületek egér leukémia LI210 sejtekre gyakorolt in vitro sejtburjánzás gátló hatása (7) Tesztmódszer 1.10V0,2 ml laukémia L1210 sejtet ültettünk be DBA/2 nőstény egereknek intraperitoneálisan. Négy nappal később az ascites folyadékot összegyűjtöttük, centrifugáltuk, és így kinyertük az elszaporodott L1210 sejteket. Az összegyűjtött L1210 sejteket RPMI1640 tápközegbe helyeztük, amely szarvasmarha embrió szérumot és 2-merkapto-etanolt tartalmazott, a sejtszuszpenzió végső koncentrációját 5.104 sejt/0,9 ml értékre állítottuk be. A találmány szerinti vegyületeket oldottuk a tápközegben, és 0,062 és 100 pg/ml koncentrációérték közötti oldatokat készítettünk. 0,9 ml L1210 sejtszuszpenziót és 0,1 ml tesztoldatot összekevertünk Petri-csészében, és 48 óra hosszat 37 °C-on inkubáltuk szén-dioxid atmoszférában. Az L1210 sejteket megszámláltuk az inkubálás előtt, és az inkubálás után, és meghatároztuk azt a koncentrációt, amely 50%-os gátlást eredményezett a kontrolihoz képest (IC50). (2) Teszt eredmények Az 5. táblázatban összefoglaltuk a találmány szerinti vegyületek egér leukémia L1210 sejtekre gyakorolt sejtburjánzást gátló hatását. A hatás erősségét az IC5<> értékekkel fejeztük ki. 5. táblázat A találmány szerinti vegyületek egér leukémia L1210-re gyakorolt sejtburjánzás-gátló hatása Vegyület IC50 (Példa száma) Oig/ml) 1. 1,7 2. 4,5 3. 0,95 4. 3,6 5. 37 6. 0,84 7. 1,9 9. 70 10. 139 12. 1,5 13. 2,8 14. 51 15. 180 17. 11,3 18. 150 Spergualin 4,6 4. A találmány szerinti vegyületek toxicitásának és élet-meghosszabbító hatásának vizsgálata egér-leukémia LI210 esetén (1) Teszt módszer !.105/0,2 ml leukémia L1210 sejtet ültettünk be intraperitoneálisan hím CDF, -SLC egereknek (6 egér csoportonként). A találmny szerinti vegyületeket fiziológiás sóoldattal hígítottuk különböző koncentrációban. Minden hígítást 0,1 ml/10 g testsúly dózisban adagoltunk naponta egyszer 9 napon át, a beültetést követő naptól kezdődően. Az állatokat 60 napig figyeltük meg a beültetést követő naptól kezdődően, és megállapítottuk a túlélési napok számát. A csoport átlagos túlélési idejét számítottuk. A kapott számot osztottuk a kontroll csoport átlagos túlélési napjainak számával, és szoroztuk 100-zal, így kaptuk az élettartam megnövekedésének értékét (T/C%). A 125, vagy ennél magasabb T/C érték igen jó hatásnak mutatkozott. A testsúlyváltozás, a találmány szerinti vegyületek toxicitásának mértékét a találmány szerinti vegyületeket 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
