190716. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidroxi-alkil-karbapeném-vázat tartalmazó antibiotikumok előállítására
1 190 716 2 TOXICITÁS Az 1. példában leírt módon előállított vegyidet toxicitását egereken intrakraniális (a koponyába való) adagolás útján határozzuk meg. Az eredményeket az alábbi táblázatban tüntetjük fel. Intrakraniális toxicitás egereken Vegyület Klinikai toxikus LDS0* tüneteket még nem (mg/kg) okozó, legmagasabb dózis (mg/kg) la N-formimidoil-tienamicin >40 -5 32 ~5 'Vegyületenként 25—25 egéren elvégzett mérés átlaga. INTRAMUSZKULÁRIS ADAGOLÁS UTÁN MÉRHETŐ VÉRSZINTEK MEGHATÁROZÁSA EGEREKEN Egereknek 20 mg/kg dózisban intramuszkulárisan beadjuk az 1. példányban leírt módon előállított vegyületet, valamint az N-formimidoil-tienamicint, és meghatározzuk a vérszint-értékeket és a felezési időket. A vegyületeket pH=7, 0,1 mólos foszfát-pufferben oldva adjuk be. Az alábbi táblázatban megadott értékek egy mérésből származnak, vegyületenként négy egeret használunk. Vérszint (/ig/ml) Felezési ... a beadás után idő GAT*, CgyUet 10 20 30 45 60 90 t1/2. ^g-óra/ml perccel perc la 14,7 13,5 8,7 3,2 0,9 <0,6 9 7,4 N-formimidoil- J26 ? 9 y 3 2 6 o y < 0 3 9 6-tienamicin *GAT = Görbe alatti terület. A VIZELETTEL KIÜRÜLT HATÓANYAG MENNYISÉGE Az 1. példában leírt módon előállított vegyület, és as N-formimidoil-tienamicin vizelettel kiürült mennyiségéegereken, a hatóanyagokat 20 mg/kg dózisban, intramuszkulárisan adagolva határozzuk meg. A hatóanyagokat pH = 7, 0,1 mólos foszfát-pufferben oldva adjuk be. Az alábbi táblázatban megadott értékek egyetlen kísérlet eredményei, vegyületenként négy egeret használunk. A vizelettel kiürült hatóanyag mennyisége, 20 mg/kg intramuszkulárisan adott hatóanyag esetében, egereken A vizelettel kiürült hatóanyag mennyisége a beadott Vegyület dózis %-ában az első 0—3 3—6 6—24 0-24 órában la 15,6 2,1 <0,2 17,7±2,9 N-formimidoil-tienamicin 12,1 0,1 <0,1 12,2 ±3,6 A találmány szerinti eljárást a továbbiakban — a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül — példákkal szemléltetjük. I. példa 3-[2- (I-Tetrahidro-tiofenium)-etilmerkapto]-6a-[l-(R)-hidroxi-etil]-7-oxo-1-azabiciklo [3.2.0]hept-2-én-2- -karboxi-látf (Ia)képlet] előállítása (B-reakcióvázlat) a/lépés 3-(2-Hidroxi-etilmerkapto)-6a-[l-(R)-hidroxi-etil]-7- -oxo-l-azabiciklo[3.2.0]hept-2-én-2-karbonsav- (p-nitro-benzil)-észter 1,69 g (4,85 mmól) 6a-[l-(R)-hidroxi-etil]-3,7-dioxo-l-azabiciklo[3.2.0]hept-2-én-2-karbonsav-(p-nitro-benzil)-észter [(Illa) képlet] 20 ml acetonitrillel készült oldatát nitrogén-atmoszférában, 0 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadjuk 726 mg (7,18 mmól) diizopropil-etil-amin 2 ml acetonitrillel készült oldatát, majd 3 perc alatt hozzácsepegtetjük 1,51 g (5,60 mmól) difenil-klór-foszfát 12 ml acetonitrillel készült oldatát. A reakcióelegyet 20 percig 0 °C hőmérsékleten keverjük, és így 3-(difenil-foszforiloxi)-6a-[l-(R)-hidroxi-etil]-7-oxo-l-azabiciklo [3.2,0]hept-2-én-2-karbonsav-(p-nitro-benzil)-észtert kapunk. Ehhez az oldathoz hozzáadjuk 726 mg (7,18 mmól) diizopropil-etil-amin 2 ml acetonitrillel készült oldatát, majd 439 mg (5,63 mmól) 2-merkapto-etanol 2 ml acetonitrillel készült oldatát. A reakcióelegyet 3 órán át 0 °C hőmérsékleten keverjük, majd 200 ml etil-acetáttal higítjuk, és 200 ml vízzel, utána 100 ml, 20%-os, vizes foszforsav-oldattal, és végül telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. A magnézium-szulfáton megszárított oldatról az oldószert ledesztillálva félszilárd maradékot kapunk, amelyet diklór-metánnal eldörzsölünk, és az így kapott szilárd anyagot kiszűrjük. Ily módon fehér színű, amorf szilárd anyag formájában 1,2 g (hozam: 61%) cím szerinti (Va) képletű vegyületet kapunk. NMR-spektrum (DMSO-d6, delta: 1,20 (3H, d, J = 6,0 Hz), 2,9-3,2 (9H, m), 5,22 (1H, d, J = 8,5 Hz) és 8,23 (2H, d, J = = 8,5Hz). IR-spektrum (kálium-bromid), rmax: 3500, 1770 és 1700 cm'1. Analízis a Ci8H2oN207S képlet alapján: számított: C: 52,93 H: 4,94 N: 6,86 S: 7,85%; talált: C: 52,83 H: 4,90 N: 6,42 S: 8,31%. b/lépés 3-(2-Metán-szulfoniloxi-etilmerkapto)-6a-[l-(R)-hidroxi-etil]-7-oxo-l-azabiciklo[3.2.0]hept-2-én-2- -karbonsav- (p-nitro-benzil)-észter (C-reakcióvázlat) 4,2 g (10,3 mmól) (Va) képletű vegyület 200 ml tetrahidro-furánnal készült oldatához —40 °C hőmérsékleten hozzáadunk 1,3 g (11,3 mmól) metán-szulfonilkloridot, majd hozzácsepegtetjük 1,26 g (12,4 mmól) trietil-amin 5 ml tetrahidro-furánnal készült oldatát. Utána a reakcióelegyet 5 órán át —40 °C hőmérsékleten, majd további 2 órán át —30 °C hőmérsékleten, nitrogén atmoszférában keverjük. Ezután 700 ml etil-acetát és 1000 ml 6%-os, vizes foszforsav-oldat kétfázisú elegyére öntjük, az etil-acetátos részt elválasztjuk, telített 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
