190684. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új fluor-prosztaciklin-származékok előállítására
9 190684 10 ra teszt-vegyületként (5Z, 7ű, 9oc, Hoc, 13E, l5R)-7-fluor-6,9-epoxi-ll,15-dihidroxi-16,16- -d ime til-p rósz ta-5,13-dién-l - sa v-metilész tért alkalmazunk. A teszi leírása a következő: É bér beagle-kutyák juguláriB vénájából 30 ml vért veszünk le és cenlrifugacsövecskékben 3 ml 3,8%-os nátrium-citrát-oldathoz adjuk. A csövecskéket lezárjuk és tartalmukat óvatosan összekeverjük. A citrát-kezelt vért 160 g sebességgel 15 percen ót 20 °C-on centrifugáljuk és a vérlemezkékben dús plazmát a leukocitafilm és eritrocitaréteg felkeverése nélkül pipettával óvatosan leszívjuk. A vérlemezkékben dús plazmát lezárt műanyagcsövecskékben 19-21 °C-on tároljuk. A vöröses színárnyalatú, hemolízist mutató készítményeket elöntjük. A többi vért a vérlemezkékben dús plazma eltávolítása után 10 percen át 900 g sebességgel centrifugáljuk. A kapott vérlemezkében szegény plazmát azonnal felhasználjuk és az aggregáció vizsgálatát 3 órán belül elvégezzük. A vérlemezkeaggregációt Payton-féle kétcsatornás aggregációs modullal végezzük el, amely a vérlemozkeaggregáció által fellépő fényáteresztésnövekedés folyamatos feljegyzése céljából írószerkezettel van összeköttetésben. Vérlemezkékben dús plazma (0%) és vérlemezkékben szegény plazma (100%) segítségével 0%-tól 100%-ig terjedő skálát veszünk fel. A hőmérsékletet 37 °C-on tartjuk és az elegyet percenként 900-as fordulatszámmal keverjük. Teflonkeverőbottal ellátott küvettóba 0,45 ml vérlemezkékben dús plazmát mérünk be és 37 °C-on keverjük. Ezután különböző koncentrációkban 5-5 pl (5Z, 7/>, 9oc, Hoc, 13E, l5R)-7-fluor-6,9-epoxi-ll,l5- -dihidroxi-16,16-dimetil-proszla-5,13-dién-l-sav-metilészter oldatokat adunk hozzá; utóbbi oldatokat 5 x 10'4 mólos, dimetil-szulfoxidos törzs-oldatból, 1 mg/ml szarvasmarha8zérum-albumint (V. frakció) tartalmazó foszfóttal-pufferozott nótrium-k lórid -oldat tál történő hígítással készítjük. Az elegyhez aggregáció-induktorként 50 pl arachidonsavat adunk olyan koncentrációban, hogy 5 perc elteltével 50-70%-os aggregáció következzék be. Az alábbi I. táblázatban a százalékos aÂÂrcgàciôgàtlôst adjuk meg, melyet az alábbi képlettel számítunk ki: %-os aggregációgátlás = teszt-vegyülettel kapott aggregáció =--------------------------------------------------------x 100 kontroll érték (hordozó) I. táblázat (5Z, 7fl, 9nc, Hoc, 13E, 15R)-7-fluor-6,9-epoxi-l 1,15— -dihidroxi-16,16-dimetil- %-os gátlás-proszta-5,13-dién-l-sav--metilészter koncentrációja ! X 10-*3 M 14.2 3 X io-*3 M 20.8 1 X ío-13 M 71.4 1 X 10-“ M 57.8 1 X lO-io M 20.8 A foszfáttal pufféról! nátrium-klorid-oldatot és az arachidonsnv-oldatol a következőképpen készítjük el: pufferolt nátrium-klorid-oldalol készítünk oly módon, hogy 0,85 BÚly/tf%-os vizes nátrium-klorid-oldathoz 1 milliinól nótrium-foszfát-pufferl (pH 7,4) adunk. Az arachidonsav-oldatot 10 mg nrachidorisav/1 ml vízmentes metanol koncentrációjú tő rzB-ol dalból készítjük. 10 milliinólos oldat előállítása céljából 0,3 ml törzs-oldatot nitrogén-atmoszférában csaknem szárazra párolunk és a maradékot 0,02 mólos ammónium-hidroxid és 0,2 ml foszfáttal pufferolt nátrium-klorid-oldat frissen elkészített Hegyében (0,75 ml) oldjuk. A további hígításokat ainmóniuin-hidroxid és foszfáttal pufferolt nétrium-klorid-oldat elegyével végezzük el. Az (I) általános képlelű vegyülelekel és ffyógyászalilag alkalmas sóikat sokfajta gyógyászati készítményben alkalmazhatjuk. A hatóanyagot tabletta, drazsé, porkeverék, kapszula, injekciós oldat, kúp, emulzió vagy diszperzió formájában vagy más megfelelő alakban készíthetjük ki. A gyógyászati készítményeket célszerűen oly módon állíthatjuk elő, hogy a hatóanyagot nem-toxikus szerves vagy szervetlen gyógyászati hordozóanyagokkal összekeverjük. Hordozóanyagként pl. vizet, zselatint, laktózt, keményítőt, magnézium-szLearálot, lalkumol, növényi olajokat, polialk ilén-glikolokat, vazelint stb. alkalmazhatunk. A gyógyászati készítmények nem-toxikus segédanyagokat (pl. emulgeáló-, konzerváló- vagy nedvesitöszereket, mint pl. szorbitán-monolaurálot, trietanol-amin-oleátot, polioxi-etilén-szorbitánl, dioktil-nálrium-szulfoszukcinátot stb.) tartalmazhatnak. A gyógyászati készítmények dózisa az adott eset körülményeitől függ. Orális adagolás esetében a napi hatóanyag-dózis általában kb. 0,1 és 0,3 pg/kg testsúly közötti érték. Eljárásunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük anélkül, hogy azt a példákra korlátoznánk. A példákban szereplő „éter" kifejezés a dielil-éterre vonatkozik. A hőmérsékleti értékek °C-ban értendők. A példákban felhasznált „petroléter” forráspontja 35-60 °C. Az 1-11. példa nem tartozik találmányunk körébe, csupán az eljárás részleteinek alaposabb bemutatását szolgálja. A 12-19. és 24-28. példábarf a kiindulási anyagok előállítását mutatjuk be. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 55 6
