190643. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-[N'-(2-klór-etil)- N'-nitrozo-karbamoil]-oligo-peptidészterek és -amidok előállítására
4 190643 5 Vegyület L 1210» L 5222» Toxici tás» (mg/kg IV CNC-Ala-Ala-Ala ++ + n.v. V CNC-Gly-NHa n.v, n.v. 20.0 13. példa +++ + 44.2 10. példa +++ ++ 44.2 11. példa +++ ++ 44.2 12. példa +++ n.v. n.v. 15. példa +++ n.v. n.v. 1) A hatékonyság értékelése: + » 200% T/C* vagy egyedi javulás, ++ > 50%-os gyógyulás egy adag hatására vagy < 50%-os gyógyulás legalább két adag hatására, +++ * 50%-os gyógyulás legalább két adag hatására, n.v. = nem vizsgáltuk 2) Az elsó adag, amely kifejezetten letális toxicitású. Ez az adag nem azonos az LDso-nel, amely lényegesen nagyobb. x) T/C = a kezelt állatok és a kontroll állatok túlélési idejének hányadosa (.100), azaz a százalékos túlélési idó raeghoszszabbodása. Például az I összehasonlító vegyület T/C értéke 133%, amely lényegesen kevesebb, mint a 13. példa szerinti vegyületnél tapasztalt 383%-os T/C érték. Az I általános képletű kiindulási vegyület reagáltatását a II általános képletű aminosav- vagy oligopeptid-észterrel, illetve - amid dal kondenzálószer, előnyösen diciklohexil-karbodiimid, N-hidroxi-szukcinimid és/vagy karbonil-diimidazol jelenlétében, előnyösen hűtés közben végezzük - körülbelül 0 *C-on -, de a szobahőmérsékleten végrehajtott reakció sem jelent nehézséget. Például 1 mmól N-[N’-(2-klór-etil)-N’-nitrozo-karbamoilj-aminosavat és 1 mmól aminosav-metilé8Ztert 20 ml diklór-metánban együtt feloldunk. Ebbe az oldatba állandó keverés közben lassan becsepegtetjük 1,1 millimól (230 mg) diciklohexil-karbodiimid 10 ml diklór-metánnal készített oldatát. A reakcióelegyet még egy óra hosszat keverjük, majd egy éjjelen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az N,N’-diciklohexil-karbamid kiszűrése után a szűrletel vákuumban bepároljuk. így a nyersterméket kapjuk, amelyet o8zlopkromatográfiával különböző arányú éter/diklór-metán eleggyel, kovasavgél tölteten tisztítunk. Az eluálás után a főfrakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot diklór-metánban oldjuk és ha szükséges, n-pentánt adunk hozzá, majd kristályosítás céljából jégszekrénybe tesszük. A következő példák magyarázzák a találmányt: 1. példa N~[N’-(2-kJór-etil)-N,-nitrozo-karbamoil]~-glicil-L-valin-metilé8zter A III általános képletben Rí jelentése hidrogénatom, Rj jelentése izopropilcsoport. 1 millimól N-[N'-(2-klór-etil)-N'-nitrozo-karbamoilj-glicint és 1 millimól L-valin-metilésztert együtt feloldunk 20 ml diklór-metánban. Ebbe az oldatba állandó keverés közben becsepegtetjük 1,1 millimól diciklohexil-karbodiimid (DCC) 10 ml diklór-metánnal készített oldatát. A reakcióelegyet még egy óra hosszat keverjük, majd egy éjjelen ét állni hagyjuk. Az N,N’-diciklohexil-karbamid kiszűrése után a szűrletet vákuumban bepároljuk. A nyersterméket oszlopkromatográfiával tisztítjuk (kovasavgél, eluálószer: éter/ /diklór-metán 1:10 arányú elegye). A tiszta terméket a főfrakciókból az oldószernek vákuumban történő eltávolítása után és diklór-metán/n-pentán elegyből való átkristályosítással kapjuk meg. Világossárga tűs kristályok. Kitermelés: kb. 70%. Olvadáspontja: 97-98 °C (bomlik). Elemi összetétel (%): számított: C 40,94; H 5,93; N 17,36; talált: C 41,09; H 6,00; N 17,16. Az »H-NMR-spektroszkópiás vizsgálatok a következő jellemző csúcsokat adták: é = 0,95 ppm (m, -C/CHa/a); & = 2,20 ppm (m, -CH=); & = 3,50 ppm (t, Cl-CHa-); é =3,75 ppm (s, -OCHa); & ~ 4,20 ppm (-N-CHa-CO- és CHa -N-NO) i = 4,60 ppm (m, -N-CH-C-); á = 6,70 ppm (d, -NH-); & = 7,70 ppm (t, -NH-). A tömegspektroszkópiás vizsgálat nem mutatja molekulaion jelét, jellemző fragmentumokat mutat azonban M-107-nél és M-108-nál, amelyek a Cl(CHa)a-N-NO ill. Cl(CHa)a-N-NOH csoportok le hasadásával értelmezhetők. 2. példa N-[N'-(2-klór-etil)-N'-nitrozo-karbamoi]]-L-vaHl-L-valin-metilészter A III általános képletben Rí és Ra jelentése izopropil-csoport. 1 millimól N-[N’-(2-klór-etil)-N’-nitrozo-karbamoil]-L-valint és 1 millimól L-valin-metilésztert reagáltatunk az 1. példában leírt módon. A termék világossárga tűs kristályokban válik ki diklór-metán/n-pentán elegyből. Kitermelés: 65%. Olvadáspontja: 125-126 »C (bomlik). Elemi összetétel (%): számított: C 46,09; H 6,91; N 15,36; talált: C 46,31; H 7,10; N 15,23. Az ^-NMR-spektroszkópiás vizsgálatok a következő jellemző csúcsokat adták: & = 0,9-1,1 ppm [m, -C(CHa)a]; á = 2,20 ppm (m, -CH=); é = 3,50 ppm (t, Cl-CHa-); í = 3,75 ppm (s, -OCHa); & = 4,20 ppm (t, -CHa-N-NO); i = 4,50 ppm (m, -N-CH-CO); é = 6,60 ppm (d, -NH-); é = 7,50 ppm (d, -NH-). A tömegspektroszkópiás vizsgálat egy molekulacsúcsot mutat 364-nél és csúcsokat m/e = 528 és 257-nél (M-107 és M-108). A két utóbbi csúcs a Cl-CHa-CHa-N-NO csoport vagy a Cl-CHa-CHa-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
