190632. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a sejtlégzést serkentő hatóanyagok előállítására borjúvérből
4 UKjb32 5 anyagot, tartalmazó oldatot dializálhatunk. A dializálás során bizonyos kezdeti szakasz után az ioncsere-membránoknál kvázi-sl.at.ionáris egyensúlyi állapot alakul ki. Az áramsűrűség, hőmérséklet, és idő megváltoztatásával a sómén t.esí lést irányíthatjuk és olyan irányba vezetjük, úgy optimáljuk, hogy a szerves anyagok vesztesége minimális legyen. A sórrienf.esítés fokát, a legegyszerűbben a vezetőképesség folyamatos megmérésével vagy az ozmolaritás folyamatos meghatározásával állapítjuk illeg. A találmány szerinti eljárás részben ismert, részben találmányi intézkedéseket az alábbiakban részletezzük. A kiindulási anyagként alkalmazandó borjúvért, mihelyt kiömlik, rögtön erélyes keveréssel, adott esetben hűtéssel egybekötve, és a kicsapódott, fihriri kiszűrésével fibrinmentesitjűk. Ez az intézkedés általában a vágóhídon foganatosítható. A fibrin eltávolítását követően a vért - adott esetben korizerválószer adagolása után - befagyasztjuk és ebben az állapotban a további feldolgozásig tárolhatjuk. A sejtlégzést serkentő hatóanyagok felszabadítása céljából a fibrinmenteBÍtett és adott esetben fagyasztott vért hemolízisnek, azaz a vörös vértesiek feloldásának vetjük alá. Ez azt jelenti, hogy a vörös vértesiek sejtmembránját, valamiképpen roncsolni kell. A sejtmembránok roncsolása kémiai és mechanikai úton lehetséges. Kémiai hemolízis céljából például a sejtmembránokat megtámadó és elpusztító enzimeket és baktériumokat adunk a fibrinmeritesített vérhez. A mechanikai hemolízis céljából például olyan anyagot adunk a vérhez, amely a sejtbelső ozmotikus nyomását fokozza (például víz, szerves oldószerek, így etanol, dietil-éler vagy acélon), minek következtében a sejtmembrán szétreped, vagy jeges hemolízist alkalmazunk, azaz a vért, olyan lassan fagyasztjuk be, hogy a sejtmembránokat, átszűrő hosszabb jégkristályok alakulnak ki. Az elvégzett hemolízis után az összes vörös vértesi feltárult, sejtanyaguk felszabadult. A hemolízist célszerűen szintén konzerválószer jelenlétében végezzük. Az így előkészített vér a találmány szerinti eljárás első lépcsőjének, a folyamatos többlépéses ultraszürésnek a kiindulási anyaga. Az ultraszűréshez olyan membránokat alkalmazunk, amelyeknek a mólsúly szerinti kizáró határa 8000 daltori feletti, előnyösen 5000 dalion feletti. Az ullraszűréshez használt membránok a legkülönbözőbb alapanyagok bői állhatnak. A cellulóz-l.riacetá tból vagy hidrofil poliolefinliől álló membránokat előnyben részesítjük. A 8000 Halton kizáró határral jellemzett membránok áteresz.töképessége az alábbiak szerint alakul: 20 000 mólsúlyú dextránt 100%-osan elválasztják, 10 000 mólsúlyű dextrán esetén a névleges elválasztás 85%-os, 6000 mólsiilyű polietilénglikol esetében 50%-os és 342 mólsúlyú laktóz esetében 10%-ob. Az. 5000 dalion kiz.áró határral rendelkező membránok esetén az, áteresztőképesség a következők szerint alakul: 10 000 mólRÚlyú dextránt 100%-osan elválasztják, 6000 mólsúlyú polielilénglikolra a névleges elválasztás 97%, és 1000 mólsúlyú polietilénglikol esetén 30%. A borjúvér fibrinmentesítéRe és hemolízise után kapott oldatnak a fent említeti membránok segítségével végzett ultraszűrése olyan terméket ad, amelyben n mólsűly felső határa 8000, illetve 5000. A folyamatos többlépéses ultraszűréR végrehajtásához, előnyösen 4 lépcsőből álló ultraszűró berendezést alkalmazunk (a példa kapcsán, az 1. ábra alapján részletesebben 'rjuk majd le a berendezést). Az ilyen berendezés B1 típusú ultraszűró-modulokat tartalmaz; ezeket a Paterson Candy International Ltd (Whitchurch, Nagy-Britannia) „Reverse Osmosis Division” című, BPI, 3/73 2 M szánni gyártmányismertetője, valamint a 2 065 812 sz. NRZK-beli közzétételi leírás ismerteti. A speciális berendezésben lévő membránok a 8000 mólsúlynál nagyobb molekulákat visszatartják: behelyezhetek azonban olyan membránok is, amelyeknek a kizáró halára mintegy 5000, azaz az 5000 mólsúlynál nagyobb rnyagoknt. nem engedik ál. Az ultraszűrő berendezés üzemeltetése során 0,8-1 MPa nyomást alkalmazunk, és a szűrendő oldatot hűtéssel 18-22 °C-on tartjuk. A berendezésbe előnyösen olyan véroldalot táplálunk, amelyhez előzetesen konzerválószert, például 4-hidroxi-benzoesav-inelilészter vagy 4-hidroxi-benzoesav-inetilészter vagy 4-hidroxi-benzoesav-propil-észter alkoholos oldalát, előnyösen a kettő etanolos oldatát adtuk. A folyamatos többlépcsős ultraszűrés első és utolsó lépcsője közölt az egyik modulban betöményitelt, a következő modulban további ultraszűrésnek alávetendő véroldat hígítása céljából annyi konzerváló oldatot alkalmazunk, hogy a modulból kilépő szűrlet mennyiségét kompenzáljuk és közel állandó váróidat mennyiséget tartsunk fenn. Célszerű, ha mindegyik lépcsőben a szűrendő oldat mennyisége közel azonos. Az utolsó lépcsőben a dialízis hígítás nélkül folyik, így az oldat koncentrálódik. Az ultraszűrés során keletkező hulladék véri kidobjuk. Az ultraszűrés során nyert ultraszürlelet - proteinektől és magasabb mólsúlyú anyagoktól mentes oldatot - csökkentett nyomáson és a 40 °C-ot meg nem haladó hőfokon, például 30-35 °C-on végzett desztillálással 20 °C-on 1,10-1,15 g/ml sűrűségű koncentráLumrná törnényltjűk. Ezen művolet célja kettős: egyrészt a hemolízis során esetleg alkalmazott szerves oldószert, illetve a konzerválószer szerves oldószerét t.ávolítjuk el a konzerválószerrel együtt, másrészt nz ultra-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
