190607. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vemhesség korai felismerésére
7 190607 8 megtermékenyült-e vagy sem. A találmány szerinti eljárás segítségével tehát az egyébként költséges állattartás ideje lerövidül, gazdaságosabbá válik. A találmány szerinti mérési módszert mind szérum-, mind plazma-, mind pedig tejprogeszteron mérésére felhasználhatjuk, bármely emlős állat esetén. Szérum esetén a minták előkészítésénél esetenként éteres extrakciót alkalmazhatunk, míg e tejből történő meghatározásnál ez a lépés elmarad, azaz a mérés direkt módszerrel történik. A találmány szerinti radioimmunanalitikai módszer általános elve ugyanaz, mint bármely más, a szabad és az antitesthez kötött antigén, célszerűen 6000 molekasúlyú polietilénglikol segítségével végzett, elválasztásán alapuló módszeré. A találmány szerinti eljárásban 125 I-dal jelzett progeszteron vetélkedik a standardokban vagy pedig a mintákban jelen levő jelzetlen progeszteronnal az antitest kötőhelyeiért. A kötött és szabad progeszteron elválasztására előnyösen polietilénglikolt használhatunk, alkalmazhatunk azonban dextrán bevonatú aktívszenet is. A vizes polietilénglikol oldat kicsapja az antitesthez kötött progeszteront és az úgynevezett szabad, antitesthez nem kötött progeszteron a felülúszóban marad, melyet eltávolítunk. Az antitesthez kötött progeszteront tartalmazó csapadék centrifugálással választható el. A csapadék radioaktivitása gammaszámlálóberendezéssel mérhető. A mért beütésszám fordítva arányos a minta progeszteron tartalmával. A találmány szerinti eljárásban a progeszteron tartalmat 1251-dal jelzett progeszteron alkalmazásával radioimmunanalitikai módszerrel mérjük. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott raidoimmunanalitikai készlet komponensei a következők: — progeszteron standard, — progeszteron antiszérum, előnyösen 11-alfa-hidroxiprogeszteron-hemiszukcinát-bovin szérum albumin ellen készült, — 1251-dal jelzett progeszteron származék, előnyösen 11-alfa-hidroxi-progeszteron-hemiszukcinát-tirozinmetilészter-monojód származék, mely jelzett antigén teljesíti a vele szemben támasztott követelményeket, nevezetesen megfelelően kötődik a specifikus antitesthez és immunológiailag hasonlóan viselkedik a mérendő antigénnel,- polietilénglikol oldat, előnyösen 15-30%-os vizes 5 polietilénglikolo(molsúly: 6000) oldat, puffer, előnyösen foszfát-puffer. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi kiviteli példák szemléltetik az oltalmi kör korlátozása nélkül. 10 1. példa Tejmintavétel tehenekből progeszteron méréshez A tehenek tőgyét, a csecsbimbókat langyos vízzel tisztára mossuk, majd Iozán fertőtlenítőszerrel átitatott vattával a csecsbimbókat fertőtlenítjük és az első tejsugarakat, 15 adott esetben 10 mg káliumbikromátot tartalmazó műanyag kémcsőbe fejjük. A vizsgálat azonnal megkezdőd- 1 et. A mintavételt célszerűen a reggeli fejősnél végezzük. A tej mintázása így egyszerű, könnyen kivitelezhető, gyors f úyamat. A nagyüzem tehenészetekben a fejőházas rend- 20 szereknél könnyen megoldható az. átlagmintavétele, tehenenként a tej fejőedényben külön kerül kifejésre. 2. példa A reagensek elkészítése 25 a) a liofilizált 0,05 M-os foszfát-puffért 200 ml desztillált vízben oldjuk és az oldat pH-ját 0,1 M sósavval vagy 0,1 M vizes nátriumhidroxid oldattal 7,3-ra állítjuk. b> a liofilizált progeszteron antiszérumot 10,0 ml desztillált vízben oldjuk. Ahhoz, hogy az antiszérum oldat 30 elegendő 100 meghatározáshoz, az oldást célszerű a megadott mennyiségnél 0,2-0,3 ml-rel több desztillált vízzel végezni. ci A 125I-dd jelzett progeszteron oldatot 10,0 ml foszfátpufferrel hígítjuk. Az egyes készletek 1 pCi jódjelzett 35 progeszteron oldatot tartalmaznak, ez szabadszintű mennyiség, előnye, hogy nem szükséges hozzá izotóp laboratórium, d) Standard sor készítése A liofilizált progeszteron standard-ot 2,0 ml desztillált 40 vízben oldjuk: Az oldat koncentrációja 80 nmol/1 (St= standard): St 9 : a feloldott alapoldat---------------St 8 : 1,0 ml St 9 + 1,0 ml foszfát-puffer St 7 + 1,0 ml St 8 + 1,0 ml foszfát-puffer St 6 : 1,0 mlSt 7* 1,0 ml foszfát-puffer St 5 : 1,0 ml St 6 + 1,0 ml foszfát-puffer St 4 : 1,0 ml St 5 + 1,0 ml foszfát-puffer St 3 : 1,0 ml St 4 + 1,0 ml foszfát-puffer St 2 : 1,0 ml St 3 + 1,0 ml foszfát-puffer St 1 : 1,0 ml St 2 + 1,0 ml foszfát-puffer St 0 : 1,0 ml foszfát-puffer----------------80 nmol/1 40 nnrol/l 20 nmol/1 10 nmol/1 5 nmol/1 2,5 nmol/1 1,25 nmol/1 0,63 nmol/1 0,315 nmol/1 0 nmol/1 25,16 ng/rnl 12,58 ng/ml 6,29 ng/ml 3,15 ng/ml 1,58 ng/ml 0,79 ng/ml 0,40 ng/ml 0,20 ng/ml 0,10 ng/ml 0 ng/ml e) A liofilizált kontroll szérumot 1,0 ml desztillált vízben oldjuk. Célszerű, ha a foszfát-puffer, az antiszérum, a standard és a kontroll szérum oldatokat a feloldás után legalább 20 percig nem használjuk fel. A tökéletes oldódást ajánlatos enyhe rázogatással vagy vortex keverővei elősegíteni. 55 -?• Példa A meghatározás menete a) a párhuzamos mérések tervezett számától függően kétkét vagy három-három műanyag csövet az alábbi célra megjelölünk: 60 — összes beütésszám, T, 5
