190607. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vemhesség korai felismerésére
9 190607 10 — standard 0—9, — vizsgálandó minták. A standard-okból célszerűen 3—3 párhuzamos mérést végzünk. b) 200-200 /A standard oldatot a megfelelő csövekbe mé- 5 rünk. c) 20-20 pl homogenizált tehén tej mintát a megfelelő csövekbe mérünk és a térfogatot 180 pl foszfát-pufferrel 200 pl-re egészítjük ki. d) 100—100 pl hígított 125 l-dal jelzett progeszteron olda- 10 tot mérünk minden csőbe. e) 100-100 pl antiszérum oldatot mérünk minden csőbe, kivéve az összes beütéss?ám mérésére szolgáló csöveket. f) Közvetlenül az c) pontban leírtak elvégzése után a csövek tartalmát vortdx keverővei homogenizáljuk, 15 kivéve az összes beütésszám mérésére szolgáló csöveket. g) A csöveket 37 °C hőmérsékleten egy órán át inkubáljuk. h) Az összes beütésszám mérésére szolgáló csövek kivéte- 20 lével minden csőhöz 500 pl 6000 molsúlyú polietilénglikol 30%-os vizes oldatát adjuk, majd vortex keverővei homogenizáljuk. i) a csöveket 20 percen át 1500—2000 g-n centrifugáljuk, ahol 25 g = k-n-r2 k= 1,118X1 CT5 r = a centrifuga karjának hossza cm-ben n = a percenkénti fordulatszám Amennyiben a centrifugálás után a felülúszó zavaros, 30 nagyobb fordulatszámmal vagy hosszabb ideig kell centrifugálni. j) A csapadékról leszivatjuk a felülúszót, vigyázva arra, hogy a csapadék a művelet közben ne keveredjen fel. k) Az egyes csöveket az 1 detektorba helyezzük és a 35 radioaktivitását a 6 kijelzőn olvassuk le (1. ábra). 4. példa Az eredmény kiszámítása és értékelése a) A standard görbe ábrázolására és a kontroll szérum- 40 minták értékelésére a Kr/ kiszámítását használjuk. B St vagy minta bcütésszáina y jqq B0 St 0 beütésszáma Egy jellegzetes mérőgörbét mutat a 2. ábra b) A standard pontokhoz kapott K%-ot a féllogaritmusos papír kordinátáján, a koncentrációt az abszcisszán tüntetjük fel. c) A kontroll, illetve a minták K%-a alapján a mérőgörbéről olvassuk le a hozzájuk tartozó koncentrációt. d) A tejminta progeszteron értékének megadásakor a mérőgörbéről levolasott értéket tízzel szorozzuk. Ha például a B0, azaz a St 0 beütésszáma 10 000 cpnr, a minta beütésszáma 5000 cpm, akkor K% =—X 100 = 100 = 50% B0 45 50 55 A mérőgörbéről leolvassuk az 50%-hoz tartozó progeszteronértéket, amely körülbelül 1,6 ng/ml, szorozzuk <50 tízzel, azaz a tejminta progeszteron tartalma 16 ng/ml. e) A tehén akkor tekinthető nem vemhesnek, ha a lefejt tejminta progeszteron tartalma 2 ng/ml-nél kisebb érték. A találmány szerinti komplett mérési eljárás összefoglalva az alábbi előnyökkel rendelkezik:- a mérési eljárásához használt, erre a célra speciálisan kiképzett műszer kis méretű, kis súlyú, hordozható, kis fogyasztású és nagy megbízhatóságú; — a komplett mérési eljárás alkalmazásával elérhető, hogy a mintavétel és a mérés egy és ugyanazon a helyen történjék; a komplett mérési eljárás cél mérőműszerének használatához nem kell szakértelem, egyszerűen, csupán egyetlen kezelőgomb bekapcsolásával működtethető, a működéshez csak egy elektromos kapcsolóra van szükség, a mérés bármilyen mostoha körülmények között elvégezhető; a komplett mérési eljárás célműszerének kialakításához csak hazai alapanyagok kellenek; az alkalmazott RIA-készlet szabad szintű, nem szükséges hozzá radioaktív izotóp labor; — az egész komplett mérési eljárás gyors és pontos, valamint gazdaságos;- a komplett mérési eljárás alkalmazásával az emlős állatok vemhessége korán és biztonsággal megállapítható, ezáltal lecsökkenthető a szaporodási ciklus, megközelíthető az ideális évenkénti ellés, a költséges állattartás ideje lerövidül, gazdaságosabbá válik. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a vemhesség korai felismerésére emlősállatok t ej -, szérum- vagy plazmaprogeszteron meghatározása út%n radioimmunanalitikai módszerrel, melynek során a fejesnél az emlős állat tőgyét, illetve a csecsbimbókat tisztíra mossuk, fertőtlenítjük, a tejsugarakat adott esetben t irtósítót tartalmazó kémcsőbe fejjük, homogenizáljuk, vagy az emlős állat vérét adott esetben véralvadás inhibit irt tartalmazó kémcsőbe csepegtetjük, azzal jellemezve, hogy a fenti mintákhoz 7,0—7,5 Ph értékig puffert, akör ilmér.yektől függően 0,1 /rCi-100 juCi/készlet raidoakt vitású 1251-dal jelzett progeszteron-származékot és progeszteron antiszérumot adunk, az elegyet önmgában ismert módon homogenizáljuk és egyensúlyig inkubáljuk, a kapott folyadékhoz a keletkező immunkomplexet vagy a szabadon maradt jelzett és jelzetlen progeszteront szilárd fázisba vivő anyagot adunk, önmagában ismert módon homogenizáljuk, majd centrifugálunk, a felülúszót eltávolítjuk, a csapadék radioaktivitását specifikusan l2SI-izotóp mérésére alkalmas hordozható, gombnyomásra működésbe hozható egycsatornás impulzus amplitúdó analizátorral mérjük, majd a minta és a standard sor radioaktivitási értékeiből a minta progeszteron tartalmát önmagában ismert módon megír átárazzuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy tartósítószerként káliumbikromátot használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemzve, hogy véralvadás inhibitorként valamilyen citrátot vagy etiléndiamino-tetraecetsavat használunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja 6
