190591. lajstromszámú szabadalom • Eljárás benzimidazo [2,1-g] benz [de] izokinolin-származékok előállítására
15 150551 16 II. táblázat A vegyületek immunoszupressziv aktivitása szájon ét adagolva (Egyedi szérum vizsgálati eljárás) (I) képlelű vegyület (R helyettesítő) Végpont dóziB (p < 0.05) mg/kg/ x 10 P.O.-ban mérve 11-trifluor-metil 0.4 11-klór 0.2 11-lrifluor-metil ( p- toluol- szulfonát) 12.5 11-bróm 12.5 26-30. példák Beültetéses - Befogadó (GVH) reakció Ezekben a vizsgálatokban szülői (C 57 BL) lép sejteket oltottunk be az Fi hibrid törzs (C 57 BL x C 3H) egereibe. A befogadó egerek nem lökték ki a beoltott lép sejteket, mivel a hibrid a szülőtől származó C 57 BL sejteket .sajátjaként' fogadta el. A beoltott sejtek azonban az idegen C 3H-ból származtatott antigének hatására mégis megsokszorozták a befogadó szövetben a reakciókat. Ennek következtében a befogadó lép megnagyobbodott. Az immunoszupresszió megakadályozza, vagy csökkenti ezt a megnagyobbodást. Az eredeti Simonsen-féle eljárás Ann. N.Y. Acad. Sei. 73, 834 (1958) egy módosított változatát alkalmaztuk. Elég sok lépsejtet tudtunk kinyerni általában anélkül, hogy manuálisan kellett volna a lépeket kezelni. Waring keveröt alkalmaztunk, amely ellentétes irányban vágó pengékkel volt felszerelve. Két hat-másodperces keverési periódus elég volt ahhoz, hogy a lépsejteket a kötőszövetektől elváljanak (egy adag 25 db C 57 BL lép volt 25 ml fiziológiás sóoldatban). Többszörös vastagságú gézen megszűrve távolltottuk el a kötőszövetet. Az így előállított sejt szuszpenziót Levy-Hauser számláló kamra segítségével úgy standardizáltuk, hogy ml-ként 6 x 108 magos sejtet tartalmazzon. 16-18 g-os C 57 BL x C 3H egerekből 10-es csoportokat alkottunk és egyenként 1 ml do- 20 nor szuszpenzióval oltottuk be őket intraperitoneálisan. A vegyületeket 0,125X metilcellulózt éB 0,2% emulgeáló szert tartalmazó fiziológiás sóoldatban mint hordozóban adagoltuk be, vagy szájon át (P.O.), vagy subcutan 25 (S.C.). 3 nappal a sejt beinjekciózást megelőzően kezdtük az adagolást és 13 napon át folytattuk naponta. A kontroll állatok csak sejteket és hordozóanyagot kaptak. 10 nappal a sejt beinjekciózás megkezdése után a 30 lépet eltávolitottuk és megmértük, és a mg ióp/testsúly g értékeket kiszámoltuk. A vegyületeket különböző dózis' szinten adagoltuk és az átlugos lép/testsúly arányt mindenegyes dózis szinten összehasonlítottuk 33 a kontroll csoport megfelelő értékeivel (amely csoport csak hordozó anyagot kapott). A p-értékeket kiszámoltuk (Student-féle 2-farok t vizsgálat) összehasonlítva a kontroll csoporttal. A legalacsonyabb drog dózis, amely jelentősen csökkenti még a lép/testsúly arányt határozta meg a végpontot. A 111. táblázatba foglaltuk össze azokat az eredményeket, amelyeket a beültetés-befogadó reakcióknál (GVH) tapasztaltunk mind a találmányban ismertetett vegyületeknél, mind a standard vegyületeknél. III. táblázat A vegyületek hatása a GVH reakcióra (I) képlet szerinti vegyület (R helyettesitő) Adagolás módja Végpont dózis (p < 0,05) mg/kg/ x 13 11-trifluor-metil P.O. 12.5 S.C. 0.1 10-trifluor-metil P.O. 25.0 11-klór P.O. 12.5 11-bróm P.O. 25.0 11-trifluor-metil (p-toluol-szulfonát) P.O. 12.5 Standard vegyületek Azathioprine P.O. 12.5 Cyclophoshamide P.O. 12.5 Cortisone P.O. 3.1 Methotrexate P.O. 0.2 9
