190591. lajstromszámú szabadalom • Eljárás benzimidazo [2,1-g] benz [de] izokinolin-származékok előállítására
11 190591 12 mért: C: 61,95; H: 2,54; N: 7,76%. 5. példa 10- és ll-fluor-7H-benzimidazo (2,1—-a) benz (de) izokinolin-7-on készítése. A 2. példa szerinti eljárást követve 15,6 g (0,1 m) 4-fluor-2-nitro-anilint katalitikusán redukálunk 400 ml 2B etanolban Raney-nikkel katalizátor alkalmazásával. A katalizátor kiszűrése után 19,8 g (0,1 m) naftoesav-anhidridet adagolunk és a 2. példában leírt melegítés és hűtés után a terméket szűréssel nyerjük ki. Tetrahidrofuránban történő átkristályosítás után az izomerek keverékét 45%-os kitermeléssel állítjuk elő. O.p.: 215-217 °C. A tetrahidrofuránból való átkristályositás után kb. 5 g anyagot HPLC művelettel szétválasztunk és igy 1,6 g 228-230 °C olvadáspontéi ll-fluor-7H-benziinidazo (2,1— -a) benz (de) izokinolin-7-on képződik, valamint kis mennyiségű 10-fluor izomer. A 11- -fluor-7H-benzimidazo (2,1-a) benz (de) izokinolin-7-on. analízis a: CisHsFNíO összegképlet alapján: számított: C: 75,00; H: 3,15; N: 9,72%, mért: C: 75,24; H: 3,21; N: 9,79%. 6. példa ll-(trifluor-metil)-7H-benzimidazo (2,1— -a) benz (de) izokinolin-7-on p-toluol-szulfonát készítése. ll-(trifluor-metil)-7H-benzimidazo (2,1- -a) benz (de) izokinolin-7-ont (0,1 g) 20 ml THF-ben oldunk és 10 ml THF-ben lévő 0,1 g p-toluol-szulfonsav monohidrátot adunk hozzá. Az oldatot szobahőmérsékleten keverjük, igy kristályos csapadék képződik. 1 óra múlva a szilárd terméket összegyűjtjük és többször mostuk THF-el, amig világos sárga színű kristályokat kapunk. O.p.: 227-229 °C. analízis a: Cz6HnNzOSF3 összeképlet alapján; számított: C: 61,17; H: 3,36; N: 5,49%, mért: C: 61,37; H: 3,33; N: 5,63%. 7. példa ll-klór-7H-benzimidazo (2,1-a) benz—(de) izokinolin-7-on p-toluol-szulfonát készítése. ll-klór-7H-benzimidazo (2,1-a) benz— (de) izokinolin-7-ont (0,1 g) kb. 30 ml THF- ben oldunk és 10 ml THF-ben lévő 0,1 g p-toluol-szulfonsavat adunk hozzá. Kb. 3 órás szobahőmérsékleten való állás után a keletkező kristályos csapadékot összegyűjtjük THF-el mossuk, , amíg világos sárga kristályokat kapunk. O.p.: 220-225 °C. analízis a: C25H17N2O4SCI összegképlet alapján: számított: C: 62,96; H: 3,59; N: 5,87%, mért: C: 62,93; H: 3,41; N: 5,85%. 3. példa 13-metil-7-oxo-1l-( trif luor-metil)-7H-benzimiadazo (2,1-a) benz (de) izokinolinium-p-toluol-szulfonát készítése. 6 gramm (0,018 m) ll-(trifluor-metil)-7H-benzimidazo (2,1-a) benz (de) izokinoiin-7-ont 25 ml metil-p-toluol-szulfonátban 100 °C-on melegítünk kb. 16 órán át, nitrogén légkörben. Lehűtés után az oldatot éterbe öntjük. A szilárd anyagot összegyűjtöttük és kétszer átkristályositjuk metanol és éter keverékéből. A cim szerinti termék 4,7 g (50.5%-os kitermelés). O.p.: 263-265 °C. analízis a: CZ7H19N2O4S összegképlet alapján: számított: C: 61,83; H: 3,65; N: 5,34%, mért: C: 61,54; H: 3,64; N: 5,11%. 9-21. példák Egér hemaglutinin vizsgálat, adagolás szájon át (közös szérum vizsgálati eljárás). Véletlenszerűen kiválasztott 20 g-os svájci him egerekből 5-ös csoportokat alkottunk, és ezek intravénásán 5xl07 juh vörös-vérsejt injekciót kaptak. Az injekciókhoz a vörös vérsejteket bárányok véréből készítettük (Alsever-féle oldatban gyűjtve) háromszori 0,85%-os fiziológiás sóoldattal történő mosással. Mindegyik vizsgálandó vegyületből 9 napra való adagot készítettünk 400 polietilénglikolban való oldással, és abból 0,1 ml-t adtunk be szájon át 3 nappal előbb kezdve "az adagolást, mint a vörös-vérsejt injekció beadását. Mindegyik vegyületből többféle dózis szintet alkalmaztunk, amelyek kétszeresei voltak egymásnak. Az egerek kontroll csoportja csak a drog nélküli hordozó anyagot kapta, de a vörös-vérsejt-injekciót ők is kapták. 6 nappal az antigén adagolás után az egerekből vért vettünk kardialis punktúrával és a csoport 5 egeréből vett vért összeöntöttük. Az összeöntött vérből származó szérumokat kiegészítő inaktiválás után (56 °C, 30 perc) megvizsgáltuk, hogy hemaglutinin tartalmukat meghatározzuk. Ehhez .Autointer 10" nevű berendezést használtunk (gyártó cég Ames Div., Miles Laboratories), amelyet arra programoztak be, hogy mikrotitrálási tálcákon 0,25%-os juh vörös vérsejt szuszpenzió - sorozatokat készítsen fiziológiás sóoldattal való kétszeres higitással. A tálcák 3 órás 37 °C-os inkubálésát követően a hemaglulanin mintákat rangsoroltuk. A négyszeres (75%), vagy ennél nagyobb mértékű antitest redukció volt a jellemző (a vizsgálandó szérumban összehasonlítva a kontroll 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
