190358. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enduracidi előállítására
1 190 358 2 már korábban említett Streptomyces fungicidicus B-5477 törzsből indukáltunk. A találmány szerinti mikroorganizmusok enduracidin-kiválasztási képessége és m-fluoro-DL-tirozin rezisztenciája egyaránt az enduracidin-termelőképesség növekedését szolgálja ; a két hatás összeadódik vagy szinergetikusan kiegészíti egymást, ilyen módon a mindkét tulajdonsággal rendelkező kettős mutánsok enduracidin-termelőképessége a szülőtörzsének többszöröse is lehet. Ilyen kettős mutánsok a korábban említett, enduracidin-kiválasztó mutánsok nyerésénél alkalmazott eljárás és a korábban szintén említett, mfluoro-DL-tirozin rezisztens mutánsok nyerésénél alkalmazott eljárás kombinációjával indukálhatok. Konkrétabban fogalmazva : először enduracidinkiválasztó mutánsokat indukálunk a szülőtörzsből, majd ezekből a mutánsokból szelektíven indukálunk m-fluoro-DL-tirozin rezisztens törzseket a fent említett eljárást alkalmazva. így például előnyösen használható a Streptomyces fungicidicus Emt 2-140 törzs (IFO 14 088; FERM P-5730; ATCC 31 731), amelyet a korábban említett Streptomyces fungicidicus GAB-453 törzsből indukáltunk. Másrészt viszont az m-fluoro-DL-tirozin rezisztens törzseket is fel lehet ruházni enduracidinkiválasztó tulajdonsággal, kettős mutánsokat képezve. Ilyen kettős mutánsokat még spontán mutánsok közül is lehet szelektálni. Az így nyert megfelelő mikroorganizmusok mikrobiológiai tulajdonságai - eltekintve az enduracidin-kiválasztó képességtől és/vagy az m-fluoro- DL-tirozin rezisztenciától - teljesen azonosak a szülőtörzsével, a Streptomyces fungicidicus B-5477 (IFO 12 439; ATCC 21 013) törzzsel, amint ezeket a tulajdonságokat a 3 786 142. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás és a Journal of Antibiotics 21, 126 (1968) leírja. Ezeknek a mutánsoknak a tenyésztésére megfelelő tápanyagokat tartalmazó tápközegeket használunk, ilyen tápanyagok az asszimilálható szénforrások, emészthető nitrogénforrások, szervetlen és szerves savak sói, általában azok az anyagok, amelyeket a mikroorganizmusok tenyésztéséhez általában használnak. Szénforrásként alkalmazhatók pl. szénhidrátok, mint pl. keményítő, dextrin, laktóz vagy maltóz, illetve zsírok és olajok, mint pl. szójaolaj, tyúkzsír - egyedül vagy egymással kombinálva. Nitrogén forrásként alkalmazhatók pl. szerves vagy szervetlen vegyületek mint pl. kukoricasikérliszt, kukoricalekvár, zsírtalanított gyapotmagliszt, karbamid vagy ammóniumszulfát. Szervetlen vegyületként pl. kálium, nátrium, magnézium, cink, kobalt, vas, mangán, foszforsav vegyületei alkalmazhatók. Szerves savak sói is hatásosan alkalmazhatók, pl. a tejsav, borkősav vagy almasav káliumvagy nátriumsói. A tenyésztés előnyösen aerob körülmények között történik, pl. levegőztetés közben rázva vagy kevertetve, általában 20 °C és 37 °C között, a pH-t előnyösen 6 és 9 értékek közé állítva. 5-9 napos, fenti körülmények között végzett tenyésztés után nagy mennyiségű enduracidin halmozódik fel a tápközegben. Az 1. Táblázatban található kétféle táptalajt alkalmazva a szülőtörzzsel összehasonlítva mutatjuk be az eredményeket a 2. Táblázatban. A 2. Táblázatból világosan kitűnik, hogy az enduracidin-kiválasztó mutánsok jobbak a szülőtörzsnél az enduracidin-termelőképesség szempontjából, különösen a nátrium-dihidrogén-foszfátot tartalmazó A tápközegben; az m-fluoro-DL- tirozin rezisztens mutánsok is jobbak a szülőtörzsnél az enduracidin-termelőképesség szempontjából, elsősorban a szervetlen foszfátkiegészítést nem tartalmazó B tápközegben. A mindkét tulajdonsággal rendelkező kettős mutáns 5-8-szoros enduracidin-termelőképességet mutat a szülőtörzshöz viszonyítva. I. táblázat. Fermentációs tápközegek A tápközeg B tápközeg Kukoricaliszt 5,0 8,0 Kukoricasikér-liszt 4,0 3,0 Kukoricalekvár 0,5 0,5 Nátriumdihidrogénfoszfát 2,6 — Nátriumklorid 0,5 0,1 Ammóniumszulfát 0,3 0,3 Cnkklorid ' 0,01 0,01 Laktóz 1,0 1,0 Tyúkzsír 1,4 1,4 Káliumlaktát 0,1 0,5 pH 6,7 6,7 2. táblázat. A szülőtörzs és mutánsai enduracidin-termelőképessége A termelt enduracidin mennyisége, mikrogramm/ml* A tápközeg B tápközeg Szülőtörzs (St. fungicidicus B-5477) 530 550 Enduracidin-kiválasztó mutáns (St. fungicidicus GAB-453) 1730 1240 m-fluoro-DL-tirozin rezisztens mutáns (St. fungicidicus Emt 36-3) 1190 2560 Enduracidin-kiválasztó és m-fluoro-DL-tirozin rezisztens mutáns (St. fungicidicus Emt 2-140) 2820 4340 * Az 1. példa (1) része < előtt leírt biológiai értékméréssel meghatározva. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
