190207. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új gonadoliberin származékok előállítására
1 190 207 2 Másnap az elegyhez 90 ml acetont adunk, és a kiváló oldhatatlan anyagot kiszűrjük. Az oldat bepárlásával olajos anyagot kapunk ; ezt etil-acetáttal eldörzsöljük, szűrjük, majd szárítjuk. A száraz kristályos anyagot háromszor 25 ml vízzel mossuk és ismét szárítjuk. Az anyag etil-acetátból forrón oldva, majd lehűtve átkristályosítható. Termelés: 18,42 g (83,1%) Op. 148-151 °C [a]” = +5,2° (c=l, DMF) Rf = 0,53; Rf = 0,38 d) Glp-His-Trp-OMe M: 466,50 15,84 g (25 mmól) Glp-His(DNP)-Trp-OMe védett tripeptidet feloldunk 100 ml dimetil-formamid és 40 ml víz elegyében. Hozzáadunk 4 ml merkapto-etanolt, majd az oldat pH-ját trietil-aminnal 8-ra állítjuk. 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban szárazra pároljuk. Az olajos anyagot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. A kapott anyagot kevés metanolban oldjuk, és éter hozzáadásával átkristályosítjuk. A kivált kristályokat szűrjük, majd szárítjuk. Termelés: 10,92 g (93.6%) Op. 228-232 °C [aj” = +4,04° (c = 0,42, DMF) Rf = 0,30 e) Glp-His-Trp-N2H3 M : 466,51 9,33 g (20 mmól) Glp-His-Trp-OMe tripeptidet feloldunk 250 ml metanolban. Hozzáadunk 20 ml 98%-os hidrazin-hidrátot. A reakcióelegyet 3 órán át 40 °C-on, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Másnap a kivált anyagot szűrjük, majd hideg metanollal mossuk és szárítjuk. Termelés: 7,58 g (81,2%) Op. 166-169 °C [a]” = -22,3° (c = 0,5, DMF) Rj = 0,50; Rj = 0,14 0 Glp-His- Trp-Ser-Tyr-OMe M : 716,8 7,0 g (15 mmól) Glp-His-Trp-N2H3-ot (az 5. sz. példa e) lépésének terméke) feloldunk 60 ml DMF- ban. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, majd keverés közben hozzáadunk 7,5 ml (45 mmól) 6n HC1 oldatot Ezután lassan az elegybe csepegtetjük 1,035 g (15 mmól) nátrium-nitrit tömény vizes oldatát, és további 15 percig 0 °C-on keverjük, majd a reakcióelegyhez adjuk 4,78 g (15 mmól) H-Ser-Tyr- OMe-HCl 15 ml DMF-ban készült oldatát. 6,25 ml (45 mmól) trietil-aminnal az elegy pH-ját semleges re állítjuk. Az elegyet éjszakán át 0-4 °C-on kever jük, másnap vákuumban szárazra pároljuk, és az olajos anyagot éterrel eldörzsöljük. A kapott porított anyag súlya 12,1 g (100%); két kis mennyiségű szennyező foltot tartalmaz, azonban tisztítás nélkül hidraziddá alakítható, amely jól kristályosodik. Metanolból átkristályosított ellenőrző anyag fizikai állandói: Op. 188-190 °C [u]~ = -3,48° (c= 1, DMF) R,1 = 0,58; R; = 0,26 g) Glp-His-Trp-Ser-Tyr~N1Hi M: 716,8 12 g nyers, porított Glp-His-Trp-Ser-Tyr-OMe pentapeptid-észtert feloldunk 200 ml metanolban, hozzáadunk 10 ml 98%-os hidrazin-hidrátot, és az elegyet 3 órán át 40 °C-on keverjük. Az elegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd a kivált kristályokat kiszűrjük, és exszikkátorban tömény kénsav fölött szárítjuk. A szárított kristályos anyagot 250 ml 0,5n sósav oldatban oldjuk, majd telített nátrium-karbonát oldattal pH 8-ra semlegesítjük, és 2 órán át 0 °C-on állni hagyjuk. A kivált kristályokat szűrjük, jéghideg vízzel mossuk és szárítjuk. Termelés: 6,12 g (a két lépésre vonatkoztatva 56,9%) Op. 205-206 °C [a]” = 21,51“ (c=l, DMF) Rf = 0,39; Rf = 0,14 Hidrazin nitrogén: talált: 3,79%, 3,76%, elméleti 3,91% h) Z Gln-Pro-NHEt M: 405,4 3,242 g prolin-etil-amidot (22,8 mmól Z-Pro- NHEt-ből hidrogénezéssel) feloldunk 70 ml tetrahidro-furánban. Az oldathoz adunk 5,60 g (20 mmól) Z-Gln-OH-t és 1,034 g N-hidroxi-benztriazolt. A reakcióelegyet jeges vízfürdőben hütjük, és keverés közben 5,34 g (25,9 mmól) diciklohexilkarbodiimid 50 ml tetrahidro-furánban készült oldatát adagoljuk hozzá. A reakcióelegyet jéghűtés mellett 5 órán át, majd további 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük, ezután szűrjük és tetrahidrofuránnal mossuk. A szürletet vákuumban bepároljuk, a maradékot kloroformban feloldjuk. A kloroformos oldatot háromszor 35 ml 1:5 arányú ammónium-hidroxid-víz eleggyel, kétszer 20 ml vízzel, majd háromszor 35 ml sósav oldattal, végül kétszer 20 ml vízzel extraháljuk. A kloroformos részt vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, kloroformmal mossuk, majd a kloroformos oldatot bepároljuk. A visszamaradó olajat 35 ml THF és 5Ó ml etil-acetát elegyében oldjuk és szűrjük. Az oldat bepárlása után kapott olajhoz 100 ml étert adunk. A szilárd anyagot a szűrön éterrel mossuk, majd vákuumban szárítjuk; súlya 7,68 g (95%). Rf: 0,45; R'f: 0,73 j) Z-Leu-Gln Pro-NHEt M : 518,57 4,5 g g (11 mmól) Z-Gln-Pro-NHE-t védett dipeptid-etil-amidot feloldunk 30 ml jégecetben. Az oldathoz 55 ml 4n jégecetes HBr oldatot adunk. A reakcióelegyet másfél órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldathoz 250 ml abszolút étert adunk, majd az elegyet 1 órán át állni hagyjuk. A kivált anyagról a felülúszót dekantáljuk. A maradékhoz 100 ml étert adunk, majd 15 perc állás után szűrjük, és éterrel bőven mossuk. A higroszkópos szilárd anyagot vákuumban foszfor-pentoxid és nátrium-hidroxid jelenlétében szárítjuk. Az anyag súlya 4,9 g (higroszkópos). Az így kapott dipeptid-etilamid-hidrogénbromidból 3,8 g-ot (II mmól) 150 ml kloroformban szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz 7,0 ml trietil-amint adunk. Ezután a reakcióelegyhez 6,4 g 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 ! 55 60 85 6
