190063. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirazolo-oxazin-, tiazin- és kinolin-származékok előállítására
7 190063 8 módszereivel történhet. Ezeknél a vizsgálati módszereknél radioaktív jelzésű arahidonsav anyagcseréjét mosott humán trombocitákon valósítjuk meg. Ennél az in vitro vizsgálatnál a radioaktiv metabolitokat a reakciókeverékből kivonjuk és vékonyrétegkromatográfiásan elválasztjuk. Az autoradigrammot vékonyréteg-számláló segítségével értékeljük ki. Ilyen vizsgálati feltételek mellett a jelzett metabolitok az ét nem alakult arahidonsavból elválaszthatók és mennyiségileg kiértékelhetők. Az inhibitorok hatására a melabolizálás alatt képződött Thromboxan B2 (TXB2) és 12-hidroxi-5,8,10-heptadekatrién-sav (HHT) ciklooxigenáz-termékek, ill. a 12-hidroxi-5,8,ll,14- -eikozatetraénsav (HETE) lipoxigenáz-termék közötti radioaktivitás-megoszlás mértéke az enzimek gátlásának. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek lipoxigenáz-gétló hatása mérhető a HETE-szintézis gátlásával. Megállapítható, hogy a TXB2 és HHT a szintézist nem befolyásolja, mig az arahidonsav-átalakuiás lecsökken. Miként a következő táblázatból kitűnik, a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek jellemző gátló hatást fejtenek ki a lipoxigenáz-lemezkékre (HETE-szintézis) (1. táblázat). A fenti eljárással megegyező módon kimutatható a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek lipoxigenáz-gétló hatása leukocitákon is. A polimorfgyűrűs humán és nyúl leukociték az arahido - savat 5-hidroxi-5,8,ll,14- -eikozatetraénsavvá (5-HETE) és Leukotrién B4-gyé (5S, 12R-dihidroxi-6 cisz, 8,10- -transz-14 cisz-eikozatetraénsav) metabolizálják. Az 5-HETE és a Leukotrién B4 vegyületek leukocitákból való felszabadításénak gátlása mértéke a találmány szerinti eljárással elöálított vegyületek lipoxigenázgátló hatásának (1. táblázat). A humán leukocitákon végzett vizsgálatot Borgeat és Samnelsson szerint, [J. Bioi. Chem. 254, 2643 (1979) és Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 76, 2148 (1979), a nyúl leukocitákon végzett vizsgálatot pedig Walker és Parish (Inter. Archs. Allergy appl. Immun. 66, 83 (1981)] szerint végezzük. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek prosztaciklin-stimuléló hatásának igazolását nyúl aortalamellákon végeztük egy órás inkubálás után a prosztaciklin-felszabadulás mértékének meghatározásával [Moncada és társai, Lancet (1977) I, 18], valamint ehhez kapcsolódóan a 6-keto-PGF 1 stabil prosztaciklin-metabolit radioimmunológiai meghatározásával (B. M. Peskar és társai, FRBS Letters 121, 25 1980) (1. 2. táblázat). A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek in vivo is hatásosak. Ezt a hatást a leukocita-vándorlás-gátlásnak ismert módon történő mérsével lehet igazolni [Higgs és társai, Biochemical Pharmacology 28, 1959 (1979); Eur. J. Pharmacol. 66, 81 (1981)]. A találmány szerinti eljárással előállított vegyiiletek az ödéma-képződést is csökkentik a karragenin-gyulladásos modellen, és gátolják a 3-16 melanoma áttételeződését [Honn és I társai, Science 212, 1270 (1981)]. Az új hatóanyagból közömbös, nem mérgező, gyógyászati célra alkalmas hordozóanyagok és oldószerek alkalmazásával ismert módon gyógyászati készítményeket, mint tablettát, kapszulát, drazsét, pirulát, granulátumot, aeroszolt, szirupot, emulziót, szuszpenziót és oldatot lehet előállítani. Ezekben a gyógyászatilag hatásos vegyületek koncentrációja az összkeverék 0,5-90%-a legyen, azaz olyan mennyiség, amely elegendő a megadott biztonságos adagoláshoz. A gyógyszerré alakítás például végezhető úgy, hogy a hatóanyagot emulgeáló- és/ /vagy diszpergálószer alkalmazása mellett oldószerrel és/vagy hordozóanyaggal oldjuk, amikor is pl. ha viz a higitószer, segédoldószerként szerves oldószereket lehet alkalmazni. Segédanyagként példaként a következőket soroljuk fel: víz, nem mérgező szerves oldd szerek, mint parafinok (pl. kőolaj-frakciók), növényi olajok (pl. földimogyoró-olaj, szezámolaj), alkoholok (pl. etil-alkohol, glicerin), glikolok (pl. propilén-glikol, polietilén-glikol), n-alkil-pirrolidonok, szilárd hordozóanyagok, mint pl. természetes kőlisztek (pl. kaolinok, timföldek, talkum, kréta), szintetikus kőlisztek (pl. nagydiszperzitású kovasfv, szilikátok), cukor (pl. nád-, tej- és szölőcukor), emulgeálószerek, mint nem-ionogén anionos emulgeátorok (pl. polioxi-etilén-zsí 'savészterek, polioxi-etilén-zsírsavéterek, alkilszulfonátok, arilszulfonátok), diszpergálószerek (pl. lignin, szulfitszennylúg, metil-cellulóz, keményítő és polivinil-pirrolidon) és csúsztatószerek (pl. magnézium-sztearát, talkum, sztearinsav és nátrium-lauril-szulfát). Az alkalmazás a szokásos módokon történi!:, előnyösen orálisan vagy parenterálisan, különösen előnyösen bőr alá. Orális alkalmazás esetén a tabletták az említett hordozóanyagokon kívül természetesen egyéb adalékanyagokat, így nátrium-citrátot, kalcium-karbonátot és dikalcium-foszfátot is tartalmazhatnak, különböző adalékanyagokkal együtt, amelyeknek a keményítő, előnyösen a burgonyakeményítő, a zselatin és hasonlók. Továbbá a tablettázásnál csúsztatóanyagok, mint magnézium-sztearát, nátrium-lauril-szulfát ás talkum is alkalmazhatók. Szájon át történő alkalmazásra szánt vizes szuszpenziók és/vagy elixírek esetében a hatóanyaghoz a fent említett segédanyagokon kívül különböző izjavító és színezőanyagok is adagolhatok. Parent.erális felhasználás céljára a hatóanyag oldatát alkalmas folyékony hordozóanyag alkalmazásával alakítjuk gyógyszerré. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
