189844. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirazolo-(1,5-a)-piridin-származékok előállítására
1 2 189 844 ráció-érték, amely az arachidonsav által okozott vérlemezke aggregációt 100%-ban gátolja. B) Ember-vérlemezke aggregációjára gyakorolt hatás 5 egészséges (30 és 42 év közötti férfi) önként jelentkező könyöki középvénájából műanyag fecskendővel vettünk vért. A citrátos vért (1 térfogat nátrium-citrát 9 téfogat vérben) 1000 fordulatszámmal centrifugáltuk. A felúszót (PRP) 10°C-on tároltuk, és 5 órán keresztül felhasználtuk, Aggregálószerként arachidonsavat (4-8 , 10"4 mól) és kollagént (6—8 pg/ml, SIGMA, Type III) használtunk. A további vizsgálat az A)-nál leírttal azonos volt. Ezen kísérlet eredménye azt mutatja, hogy a 2. példa szerinti vegyület hatásos, és szinte egyformán gátolja az arachidonsav és kollagén által indukált vérlemezke aggregációt. Ezen vegyület IC)0oO-értékei a 10'10 és 3 . 10'g g/ml tartományban vannak. Az IC, oo-értékek kb. 300-szoros eltérése az egyedek különbözőségének tudható be. Másrészről, az összehasonlító szerként használt aszpirin az arachidonsav és kollagén által indukált vérlemezke aggregációt teljesen csak 6-8 . 10’6 g/ml és 10'4 g/ml koncentrációban gátolta. 2. Kísérlet Vérlemezke aggregáció ex vivo vizsgálata Ahhoz, hogy a találmány szerinti vegyület abszorbeálhatóságát és hatását megismerjük, más vérlemezke aggregációs vizsgálatokat is végeztünk olyan nyúlból származó plazmával (PRP), amelynek előzőleg a vegyületeket orálisan beadtuk. A 2. példa szerinti vegyületet és aszpirint orálisan adtunk nyulaknak. A vegyület és az aszpirin beadása után 1 órával a femorális artériából vettünk vért. A plazma (PRP) előállítása és a vérlemezke aggregáció meghatározása az 1. kísérlet szerint történt. Az eredmények az 1. ábrán láthatók, és azt mutatják, hogy a 2. példa szerinti vegyületnek az arachidonsawal kiváltott vérlemezke aggregációt gátló hatása az aszpirinének többszöröse. 3. Kísérlet A vér viszkozitására kifejtett hatás 300-380 g-os hím Wistar patkányokat használtunk a kísérlethez. A 2. példa szerinti vegyületet 10 mg/kg mennyiségben naponta két alkalommal adtuk orálisan a patkányoknak 2 napon át. Az utolsó beadástól számított 1 óra elteltével a patkányokat 35 mg/kg pentobarbittal intraperitoneális adagolásával elaltattuk, és a farki vénából vért vettünk. Ehhez etilén-diamin-tetraecetsavat adtunk 2 millimól végkoncentrációig. A teljes vér és plazma viszkozitását rotációs viszkoziméterrel (Contraves LS-30, nyírási fordulatszám 0-128,5 sec'*, 37oC) mértük és a hematokritot mikrohematokrit centrifugálással (13,000 g 5 perc) határoztuk meg. Mint a 2. táblázatban látható, az egész vér viszkozitása 0,1285, 0,514, 6,426, 25,7 és 128,5 sec'1-es nyírási fordulatszámnál 50,1, 36,1, 23,5, 19,2 és 12,0%-kai csökkent, de a plazma viszkozitására és hematokritra való hatást nem figyeltünk meg. 4 Kísérlet Gyomor-bélrendszeri bántalmak patkányokban 250-300 g-os hím Wistar patkányokat használ-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 tunk ehhez a kísérlethez. A jóllakott állapotban bekövetkező fekélyképződést a következőképpen vizsgáltuk: A kísérlet előtt nem éheztetett patkányoknak orálisan adtuk be a vizsgálandó vegyületeket. Az állatok szabadon ehettek, ihattak a beadástól számított 24 órán át. Az állatokat leöltük, a gyomrot és a beleket eltávolítottuk és a sérülést vizsgáltuk. Egy másik kísérletben a patkányok a vegyület beadását megelőző 24 óra alatt nem kaptak élelmet és vizet. A 2. példa szerinti vegyületet és aszpirint orálisan adtuk be az állatoknak, és ezután szabadon ihattak, de nem ehettek. 24 óra elteltével az állatokat megöltük. A gyomrot és a beleket eltávolítottuk, és körültekintően megvizsgáltuk, hogy vajon sérülés keletkezett-e. Mint a 3. táblázatban látható, a vegyület fekélyképző hatása az aszpirinének 1/4-e és 1/10-e között változik. 5. Kísérlet Akut toxicitás (LD5 0 ) A 2. példa szerinti vegyület akut toxicitását Wistar patkányokon és ICR egereken vizsgáltuk, az eredmény a 4. táblázatban látható. 1. táblázat A vegyületek arachidonsawal kiváltott nyűlvérlemezke aggregációjára gyakorolt hatás A példa száma ICioo (g/ml) 1. 6x 10'6 2. 3 x lO"8 3. 2 x 10-7 4. 1 x 10« Aszpirin 4 x 10 '6 2. Táblázat A 2. példa szerinti vegyület hatása a vér viszkozitására és hematokritokra patkányokban Hordozó 2. példa szerinti vegyület Nyírási tordulatszám (sec1 ) 0,1285 0,514 6,425 25,7 128,5 Teljes vér viszkozitása (mPS) 49,7 26,9 9,55 ±6,47 ±2,08 ±0,56 6,41 ±0,25 4,18 ±0,09 24,8 17,2 7,31 5,18 3,68 ±2,71 ±1,31* ±0,36* ±0,12* ±0,08* A plazma viszkozitása (mPS) 1,15 ±m 1,14 ±07n Hematokrit(%) 46,1 ±1,15;; 46,0 ±5771 ”a hordozótól való szignifikáns eltérés, p < 0,05 (Wilcoxon-féle hibahatár) 3. táblázat 55 _________A vegyületek fekélyokozó hatása 2. példa szerinti Aszpirin vegyület Jóllakott >1000 33Ö Éheztetett 300<UDSO<500 25 <UDSO<50 Az UD5 o értékekhez az egységek: mg/kg, p. o. 60 Az UDjo azt a dózist jelenti, amely az állatok 50%ánál fekélyt okoz. 4
